本發(fā)明涉及醫(yī)學工程技術領域，具體而言，涉及一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用。背景技術：視網膜色素變性(retinitispigmentosa，rp)是一組視網膜光感受器異常導致的遺傳性致盲眼底病，在全世界的發(fā)病率約為1/3000～1/4000，而在中國人群的發(fā)病率可達1/3500，由于我國人口眾多，rp患者可達三十萬之眾，給家庭和社會帶來了沉重的負擔。目前針對rp的診斷和面臨許多困難，尚無有效的手段，這主要歸因于其在臨床表型和遺傳上具有高度的異質性，針對其病理機制系統(tǒng)研究不足。典型的rp患者早由于視桿細胞功能缺陷而出現夜盲和視野狹窄，逐步發(fā)展為管狀視野，直至失明；眼底檢查可見視網膜色素沉著。在病理學方面，典型的rp主要影響視桿細胞，造成視桿細胞死亡并繼發(fā)視錐細胞死亡，主要表現為光感受器受損、變性，視網膜外核層逐漸變薄直至消失，視網膜外網層及其他相關細胞層出現相應病理改變。此外，由于rp在臨床表型和遺傳模式上均具有高度的異質性，導致許多的rp致病機制尚不清楚，這為rp疾病的臨床診斷帶來極大困難，因此針對rp疾病的致病機制研究迫在眉睫。而目前，缺乏相應的rp疾病模型。小鼠卵巢早衰POF模型。皮下成瘤動物模型造模

    或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。以下結合實施例對本實用新型的特征和性能作進一步的詳細描述。實施例1本實用新型提供一種高原性人類疾病模型制備環(huán)境模擬系統(tǒng)，包括功能設備集成底座1和設置在功能設備集成底座1上的飼養(yǎng)倉2，所述飼養(yǎng)倉2具有無極調控微負壓裝置、高原低氧環(huán)境模擬裝置、高原光照環(huán)境模擬裝置15、高原溫度環(huán)境模擬裝置16、高原濕度環(huán)境模擬裝置17、動物行為學遠程觀察單元18，所述飼養(yǎng)倉2內設置有若干代謝籠3，飼養(yǎng)倉2前后箱體上設置有觀察窗4和若干操作窗5，飼養(yǎng)倉2左右箱體上分別設置有小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7，所述代謝籠3還包括設置在代謝籠3上的投料斗8、飲水瓶9和設置在代謝籠3下方的聚糞斗10、尿液排出口11、糞便排出口12。本實施例的工作原理：本裝置的各個功能均通過設置在飼養(yǎng)倉2上的功能控制面板19控制，本裝置外形采用304不銹鋼，具有良好的氣密性。實驗動物送入飼養(yǎng)倉2內部后，關閉小物件傳遞窗6和大物件傳遞窗7，通過功能控制面板19實現飼養(yǎng)倉2內部環(huán)境模擬。兔動物模型飼養(yǎng)通過建立腦缺血-再灌注動物模型，模擬人類ICVD的病理過程。

    輕微的接觸角膜的中心頂端。一通道正極接右眼，二通道正極接左眼。通過針管對雙眼滴生理鹽水，改善金環(huán)電極及角膜的接觸效果。保證兩個金環(huán)電極以相同的角度、方式接觸兩眼角膜中心正端的相同位置。5記錄示波信號確認無誤后，關閉暗紅光?？梢韵葒L試記錄一下暗適應光強為·s/m2的erg檢測，確認一下信號的質量：如果雙眼的振幅出現了與預期不同的較大差異，建議再次檢查金環(huán)電極的安裝位置。然后依次記錄暗適應光強為·s/m2的信號。需要注意的是，完成暗適應·s/m2光強檢測后，系統(tǒng)將自動打開背景光。同樣的，需要打開定時器，光適應10-15分鐘，再記錄。6經過光適應后，依次記錄光適應·s/m2以及·s/m2光強下波形，記錄·s/m2光強下閃爍視網膜誘發(fā)電位。結果發(fā)現在4個月時，與ctrl(對照)小鼠比較，cko(gm20541基因敲除純合子小鼠)小鼠的a波和b波在暗適應和光適應條件下均明顯降低，表明gm20541敲除后導致視力受損(見圖5和圖6)。實施例4視網膜石蠟切片h&e染色：對4月齡小鼠的視網膜進行石蠟切片、蘇木精-伊紅染色法(h&e染色方法)染色，具體操作如下：1)快速取小鼠眼球組織，并置于固定液中固定24h；2)石蠟包埋，切片，厚度為4μm；3)切片常規(guī)用二甲苯脫蠟。

    小鼠尾尖用酒精擦拭尾巴，引起輕微的血管擴張；用無菌手術刀、刀片或鋒利的剪刀，快速截斷小鼠尾尖1-2毫米。如果需要多次采，之后每次需截除2-3毫米；從尾部像尾尖方向按摩，增加血流；用采集血液；結束后，按壓傷口或使用止血劑來止血；每次量大約可達。小鼠眼球取血單手保定好小鼠；必要時剪掉小鼠胡須，防止污染血液；輕壓取血側眼部皮膚，使眼球充血突出；用彎頭鑷夾取眼球并快速在摘?。煌瑫r用左手中指輕按小鼠心臟部位，以加快心臟泵血速度；當血液流盡時，用脫臼法處死小鼠；大鼠眼眶取血先將小鼠進行麻醉，大鼠翻正反射消失時不在繼續(xù)麻醉；抗凝處理過的玻璃毛細采樣管，掰成2-3厘米長度；右手食指和拇指輕按眼眶兩側皮膚，使眼球突出，毛細管從內側的眼球與眼瞼的縫隙處進入，輕輕旋轉毛細管，稍微深入眼球后上方，血液流速快的時候4-5滴即可，溫柔的將毛細管取出；用棉簽按壓大鼠眼眶止血，每次可取血50-100微升，將血液放入冰盒中保存。小鼠心臟取血先將小鼠麻醉，稍靠右側平躺在手術板上固定；左側第三四根肋骨間觸摸心臟，跳動明顯，慢慢進針；針有回血停止進針，開始取血；一次可以300到500微升，小鼠存活，放到加熱墊上待小鼠蘇醒后放入籠中。LPS脂多糖致膿毒血癥肝損傷小鼠模型。

    用一次定量放血法可擺分之擺造成出血性休克，擺分之擺死亡，這就符合可重復性和達到了標準化要求。(三)可靠性復制的動物模型應該力求可靠地反映人類疾病，即可特異地、可靠地反映某種疾病或某種功能、代謝、結構變化，應具備該種疾病的主要癥狀和體征，經化驗或X線照片、心電圖、病理切片等證實。若易自發(fā)地出現某些相應病變的動物，就不應加以選用，易產生與復制疾病相混淆的疾病者也不宜選用。(四)適用性和可控性供醫(yī)學實驗研究用的動物模型，在復制時，應盡量考慮到今后臨床應用和便于控制其疾病的發(fā)展，以利于研究的開展。(五)易行性和經濟性在復制動物模型時，所采用的方法應盡量做到容易執(zhí)行和合乎經濟條件原則。以上就是上海研錄為你分享的小知識，如果想要了解更多相關內容，可與我們聯系，我們期待您的來電!小鼠膽管結扎誘導炎癥性肝損傷和肝纖維化模型的建立。江蘇腦定位動物模型構建

致使腎小球系膜這以 IgA 為主的免疫復合物沉積,同時使系膜細胞增生,基質增多。皮下成瘤動物模型造模

    結果發(fā)現在這些組織中，gm20541均有表達，說明該基因可能在體內發(fā)揮重要功能。2采用免疫印跡(westernblot)的方法檢測gm20541基因在不同組織中的表達。方法：(1)分別獲取小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾，充分研磨后加入200μl蛋白裂解液ripa。(2)超聲破碎細胞后，在冰上裂解20min。(3)4℃，16000g離心10min后，取上清轉移至另一干凈離心管，加入50μl的蛋白上樣液，混勻后95℃加熱5min。(4)待樣本冷卻后，分別取20μl，160v電壓進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sds-page)以分離蛋白。(5)sds-page結束后，根據需要，裁剪適當大小的硝酸纖維素膜，按順序鋪上濾紙、膠、硝酸纖維素膜及濾紙，并趕去氣泡，轉膜槽放入冰水浴中，采用恒流，轉膜2h。(6)轉膜完畢后，純水沖洗硝酸纖維素膜一遍，晾干并標記。然后用8％的脫脂牛奶封閉2h。(7)封閉完成后，加入一定量的按一定比例(按照抗體使用說明書)稀釋于封閉液的一抗，4℃孵育過夜。(8)回收一抗，1×tbst緩沖液洗膜4次，每次10min，根據一抗來源，選擇合適二抗，用1×tbst稀釋辣根過氧化氫酶(hrp)標記的二抗，室溫于搖床上孵育2h。(9)二抗孵育結束后，用1×tbst洗膜3次，每次10min，用thermo的elc發(fā)光試劑盒檢測蛋白。皮下成瘤動物模型造模