CKK-8原理

CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發(fā)的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比，用酶聯(lián)免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數(shù)量，在一定細胞數(shù)量范圍內甲臜形成的量與細胞數(shù)成正比。

將她培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育1-4小時。天津cck8 graphpad 作圖

制作標準曲線1.先用細胞計數(shù)板計數(shù)所制備的細胞懸液中的細胞數(shù)量，然后接種細胞。2.按比例(例如：1/2比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。3.接種后培養(yǎng)2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時間后測定O.D值，制作出一條以細胞數(shù)量為橫坐標(X軸)，O.D值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據(jù)此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數(shù)量(使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時間)。天津cck8實驗數(shù)據(jù)怎么用統(tǒng)計學處理MTT與CCK8區(qū)別是什么?

在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450nm的吸光度作為空白對照。·金屬對CCK-8顯色有影響：當終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應，使靈敏度降級。如果終濃度是10mM的話，將會*****。·懸浮細胞由于染色比較困難，一般需要增加細胞數(shù)量和延長培養(yǎng)時間。·加入CCK-8時，如果細胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色或pH值已變化，建議換用新鮮的培養(yǎng)基。·用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定，且要擦拭干凈樣品板了。

CCK8，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2、MTT法：其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。CCK8雖好,這些情況下不建議用!

酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

· CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結果。

· CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。

· 當在培養(yǎng)箱內培養(yǎng)時，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔加培養(yǎng)基或者PBS，不作為測定孔用。

· 在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗時，還應考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度作為空白對照。 這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.天津cck8避光

細胞增殖與毒性檢測實驗方法及經(jīng)驗總結-CCK-8 法.天津cck8 graphpad 作圖

CCK-8的原理

所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢，因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低，有些細胞在***處理后，可能活細胞數(shù)不變，但是代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）？當然也有解決的辦法，下期給大家介紹。因此可利用這個原理進行細胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時檢測讀數(shù)。用途及常用的公 天津cck8 graphpad 作圖