1、種板數(shù)：這個(gè)要查文獻(xiàn)，看你所用細(xì)胞別人有無(wú)做過(guò)，把范圍大致找出。記住還要參考說(shuō)明書，這個(gè)很重要。然后稀釋一系列濃度種板。首先你要觀察多長(zhǎng)時(shí)間細(xì)胞可貼壁完全，一般貼壁生長(zhǎng)24小時(shí)。然后還有在你的實(shí)驗(yàn)時(shí)間內(nèi)，不同細(xì)胞數(shù)下孔內(nèi)生長(zhǎng)情況。比如我擬定考察4天的時(shí)間，那么在4天內(nèi)，細(xì)胞是剛好鋪滿還是堆積生長(zhǎng)？因?yàn)槊繅K板都會(huì)設(shè)置對(duì)照孔，也就是含有細(xì)胞的培養(yǎng)基+CCK8，這個(gè)數(shù)值是板上的比較大數(shù)值，CCK8試驗(yàn)比較好OD值在1.0附近，所以這個(gè)比較大數(shù)值比較好能控制在1.0左右。我的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)是不要讓細(xì)胞長(zhǎng)滿，一旦長(zhǎng)滿了很難去判斷是否堆積生長(zhǎng)了，對(duì)***能否順利進(jìn)入細(xì)胞有影響此為其一，其二生長(zhǎng)不均勻易導(dǎo)致孔間OD值數(shù)據(jù)偏差大，而且OD值也很大。CCK-8 反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，干擾實(shí)驗(yàn)測(cè)定。上海cck8同仁

在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育2小時(shí)左右就可以了。6.用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度（使用酶標(biāo)儀之前要提前開啟10min預(yù)熱）測(cè)定完成后，保存數(shù)據(jù)。7.連續(xù)五天檢測(cè)，每天保持一樣的時(shí)間點(diǎn)加入CCK-8溶液，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育時(shí)間相同。注：若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉***影響。當(dāng)然***影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入***后的空白吸收即可。上海cck8同仁CCK8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)原理.

CCK法的操作步驟（更多內(nèi)容請(qǐng)見說(shuō)明書）：實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5%CO2）。2、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。5、若暫時(shí)不測(cè)定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測(cè)定，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

摸條件包括1、種板數(shù)；2、種板后細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)時(shí)間；3、加藥后的孵育時(shí)間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時(shí)間。看起來(lái)很多，其實(shí)這就是一個(gè)實(shí)驗(yàn)。而且都是種的空白板，也就是不加藥物，只加細(xì)胞和CCK8。我沒(méi)有做過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）。都說(shuō)CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個(gè)試劑盒。

當(dāng)然仁者見仁智者見智，我寫的只是個(gè)人實(shí)驗(yàn)心得，但供參考。歡迎大家拍磚共同進(jìn)步。實(shí)驗(yàn)是簡(jiǎn)單的，道路是曲折的，時(shí)間就是用來(lái)浪費(fèi)的，科研就是自?shī)首詷?lè)使勁折騰。

MTT與CCK8區(qū)別是什么?

CCK-8的用途1.細(xì)胞增殖測(cè)定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等。

2.***篩選：在測(cè)定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí)，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8。

3.細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響，比如在UV、低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上。

4.**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的，我見過(guò)做**的團(tuán)隊(duì)，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買，比如果子老師所在的團(tuán)隊(duì)，哈哈哈。

5.微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn)。 微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn)。北京共培養(yǎng)細(xì)胞cck8

換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基中以換液的形式加在孔板中避免氣泡產(chǎn)生。上海cck8同仁

再此，給大家分享個(gè)小事情，有次，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)已經(jīng)到，但是盒子不夠，我們就用了某天的CCK-8試劑盒，***出來(lái)的結(jié)果如圖3。這個(gè)結(jié)果是我所不能接受的。后來(lái)用Sigma的再重復(fù)了一次，如圖4，這種有深有淺的才是該有的結(jié)果。我想說(shuō)的是在有能力選擇范圍內(nèi)，盡量選擇好一點(diǎn)的試劑，免得浪費(fèi)時(shí)間。后來(lái)博士換了導(dǎo)師，換了課題，沒(méi)有再用Sigma的了，用了一個(gè)日本的牌子，名字和貨號(hào)如下，結(jié)果只能說(shuō)justsoso，肯定沒(méi)有Sigma的好用。二次上海cck8同仁