CCK8的優(yōu)點(diǎn)：方法方便，不用洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；CCK-8快速檢測(cè)；CCK-8檢測(cè)靈敏度高，細(xì)胞密度低也可以檢測(cè)；CCK-8的重復(fù)性優(yōu)于MTT法；CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性很??；CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)試劑中是1瓶溶液，不需要現(xiàn)用現(xiàn)配，即開即用。CCK8的缺點(diǎn)：相比于與MTT法，CCK8的價(jià)格比較昂貴生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。用途：***篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn)。代謝率低了以后，細(xì)胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少。上海dojindo cck8說明書

沒有做過MTT實(shí)驗(yàn)，但其實(shí)原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機(jī)理不一樣）。都說CCK8簡(jiǎn)單點(diǎn)而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個(gè)試劑盒。CCK8的說明書大家一定要認(rèn)真閱讀，里面很多細(xì)節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細(xì)胞的種板數(shù)都很有參考價(jià)值，因?yàn)槟鞘欠磸?fù)驗(yàn)證過的比較好數(shù)值。但無論如何，做這個(gè)試驗(yàn)一定要摸條件。你就算再懶，這個(gè)懶不得，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細(xì)胞毒性試驗(yàn)為前提，如果你做的是促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的***的藥效實(shí)驗(yàn)?zāi)蔷土懋?dāng)別論了。北京cck8 odMTT與CCK8區(qū)別是什么?

CCK-8的原理

所以粗略的可以認(rèn)為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢，因?yàn)檫@里沒有考慮到細(xì)胞代謝水平的高低，有些細(xì)胞在***處理后，可能活細(xì)胞數(shù)不變，但是代謝率低了以后，細(xì)胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測(cè)出的Formazan也會(huì)減少，所以此時(shí)怎么算呢（此時(shí)我就比較懷戀中性紅了）？當(dāng)然也有解決的辦法，下期給大家介紹。因此可利用這個(gè)原理進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時(shí)檢測(cè)讀數(shù)。用途及常用的公

讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的吸光度。

***率（％）= [（對(duì)照孔吸光度-實(shí)驗(yàn)孔吸光度）/（對(duì)照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50

注意事項(xiàng)

CCK8法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況基于的原理是脫氫酶催化的反應(yīng)，如果實(shí)驗(yàn)處理?xiàng)l件中存在還原劑的影響，應(yīng)事先去除。如果實(shí)驗(yàn)條件中存在還原物質(zhì)，需單獨(dú)測(cè)定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計(jì)；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進(jìn)行檢測(cè)。 細(xì)胞毒性測(cè)定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響，比如低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上。

CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)研究生二年級(jí)的時(shí)候，當(dāng)時(shí)用的***個(gè)盒子是Sigma的，當(dāng)時(shí)的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma。那個(gè)盒子給了我莫大的鼓勵(lì)，因?yàn)樵谀侵白龇肿涌寺∫恢倍疾皇呛茼樌?。這個(gè)盒子是我的碩士老板從美國帶回來的，品質(zhì)有保證，***的結(jié)果也是很好的。后面在做CCK-8的實(shí)驗(yàn)時(shí)，我們?cè)谟羞x擇的情況下都會(huì)買sigma，下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖。其實(shí)也不貴，只是到貨時(shí)間太慢。不同的種板數(shù)對(duì)檢測(cè)***的IC50影響大嗎？江蘇cck8數(shù)據(jù)作圖

換液的意思是將cck8加在培養(yǎng)基中以換液的形式加在孔板中避免氣泡產(chǎn)生。上海dojindo cck8說明書

。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測(cè)定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度即為空白對(duì)照。在做加藥實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)考慮***的吸收，可在加入***的培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時(shí)間，測(cè)定450 nm的吸光度作為空白對(duì)照。金屬對(duì)CCK-8顯色有影響：當(dāng)終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降級(jí)。如果終濃度是10 mM的話，將會(huì)*****。懸浮細(xì)胞由于染色比較困難，一般需要增加細(xì)胞數(shù)量和延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。上海dojindo cck8說明書