CCK8，即Cell Counting Kit-8，與MTT法的主要區(qū)別如下：一、原理不同1、Cell Counting Kit-8：CCK-8 試劑盒利用了日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)。2、MTT法：其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。***篩選：在測定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí)，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8。湖北cck8細(xì)胞

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個(gè)HIF1a***劑實(shí)驗(yàn)時(shí)，多加了這個(gè)***劑的濃度，江蘇cck8增殖曲線CCK8試驗(yàn)的總體實(shí)驗(yàn)心得.

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)就是對(duì)細(xì)胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個(gè)***或者說是一個(gè)作用條件對(duì)細(xì)胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標(biāo)準(zhǔn)來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實(shí)驗(yàn)操作和注意事項(xiàng)。MTT實(shí)驗(yàn)操作1、在96孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，設(shè)置對(duì)照組（細(xì)胞+無血清培養(yǎng)基）、實(shí)驗(yàn)組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：2、在對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中，每孔加入細(xì)胞懸液100ul

CCK-8的用途1.細(xì)胞增殖測定：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)在很多領(lǐng)域都會(huì)用到，比如**相關(guān)、損傷后修復(fù)等。2.***篩選：在測定一個(gè)***的毒性和安全有效濃度時(shí)，經(jīng)常會(huì)用到CCK-8。3.細(xì)胞毒性測定：這個(gè)可以和各個(gè)處理因素對(duì)細(xì)胞活性和增殖的影響，比如在UV、低氧或者什么化學(xué)物品對(duì)細(xì)胞的影響上。4.**藥敏試驗(yàn)：這個(gè)是用的比較廣的，我見過做**的團(tuán)隊(duì)，買CCK-8都是一整箱，一整箱的買，比如果子老師所在的團(tuán)隊(duì)，哈哈哈。5.微生物對(duì)細(xì)胞的毒性或增殖的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞增殖檢測——CCK8.

貼壁生長的時(shí)間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個(gè)時(shí)間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時(shí)間對(duì)自己安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實(shí)驗(yàn)吧。3、加藥后的孵育時(shí)間，我的實(shí)驗(yàn)摸了3個(gè)時(shí)間，24h，48h，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時(shí)間。太長了就沒有必要了，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個(gè)問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點(diǎn)文獻(xiàn)報(bào)道不一致。本人**終采用的是后者。CCK8的實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)驗(yàn)分組及檢測方法.北京cck8凱基

加入CCK8那會(huì)空白對(duì)照組的細(xì)胞剛好長滿嗎？湖北cck8細(xì)胞

培養(yǎng)基對(duì)CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會(huì)與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會(huì)增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實(shí)驗(yàn)均要設(shè)定空白對(duì)照。另外，血清不影響測定，所以我用CCK-8來測定病毒對(duì)細(xì)胞活性的影響或者某個(gè)***對(duì)病毒復(fù)制的影響時(shí)，我都小心翼翼的測很多個(gè)時(shí)間點(diǎn)，說實(shí)話，效果不是很好。所以我比較喜歡中性紅。湖北cck8細(xì)胞