基于陽離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過內(nèi)吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類,前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,適用也較為廣范。以上單一成分的轉(zhuǎn)染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉(zhuǎn)染試劑,不局限于單一成分,混合了不同配方的脂類(非脂質(zhì)體)、加上蛋白質(zhì)組分、以及各種的成分,兼具了轉(zhuǎn)染效率高和細胞毒性小的優(yōu)勢,且操作更加簡單,易于高通量。臨床級******毒載體生產(chǎn)必備轉(zhuǎn)染試劑..上海核酸轉(zhuǎn)染試劑盒
細胞轉(zhuǎn)染過程:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗。優(yōu)勢:1.具有細胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡便、節(jié)省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進行簡單稀釋,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優(yōu)化原代細胞轉(zhuǎn)染試劑推薦連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理。
細胞轉(zhuǎn)染過程X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類多組份試劑,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2μm濾膜過濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細胞分析的多種實驗。優(yōu)勢:1.具有細胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡便、節(jié)省時間,只需對X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進行簡單稀釋,再與質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細胞添加反應(yīng)混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優(yōu)化工作。
對 HepG2 細胞轉(zhuǎn)染效率的比較
右圖:使用以上轉(zhuǎn)染試劑將 GFP 的 cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)商的提供的轉(zhuǎn)染步驟轉(zhuǎn)染到 HepG2 細胞(在膠原預(yù)處理的培養(yǎng)皿中培養(yǎng))。在轉(zhuǎn)染 48 小時之后,用流式細胞儀檢測 GFP 陽性細胞(%)和熒光強度。
左圖:血清和***存在的條件下能提高 LipoD293 試劑(升級版)對在 HepG2 細胞的轉(zhuǎn)染效率。通過三種不同的條件下轉(zhuǎn)染 HepG2 細胞(生長在膠原處理的培養(yǎng)皿上)---無血清和***,10% 血清和***的存在,轉(zhuǎn)染 5 小時后換液和不換液。
試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實現(xiàn)靶向敲低。
原代細胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖,因此,它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命(即它們是有限細胞系),且隨著傳代的進行,具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據(jù)支配地位,從而造成了細胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對來說,這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代。一般會同時設(shè)置對照,對RNAi結(jié)果進行比較。RNAi的成功取決于正確導(dǎo)入合適量的siRNA,達到比較大預(yù)期反應(yīng)。原代細胞轉(zhuǎn)染試劑推薦
轉(zhuǎn)染是將核酸導(dǎo)入真核細胞中的過程,是細胞生物學(xué)、基因表達和基因***實驗中的關(guān)鍵步驟。上海核酸轉(zhuǎn)染試劑盒
將膠質(zhì)瘤干細胞(3×105)接種至6孔板中,然后使用riboFECTCP轉(zhuǎn)染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉(zhuǎn)染進膠質(zhì)瘤干細胞(DP3321、DP7857)中,48h后,qRT-PCR和westernblots檢測siRNA***效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為46.32%、49.71%和43.64%,DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為53.21%、47.46%和46.31%。將1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCPRegent在30μlriboFECTTMCPBuffer中混合以產(chǎn)生轉(zhuǎn)染混合物。然后將混合物加入DMEM(siRNA濃度:50nM)中,與原代小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)48h。RT-PCR和westernblot分析檢測轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染TREM-1siRNA后******了OGD誘導(dǎo)的TREM-1、p-SYK、SYK、CARD9、p-p65和NLRP3的上調(diào)。上海核酸轉(zhuǎn)染試劑盒