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用LipoFectMax?轉染Hela細胞,左圖轉染GFPcDNA,右圖共轉染GFPCDNA和GFP靶向siRNA。轉染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。4適用于神經細胞的轉染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine®2000分別對小鼠神經元細胞進行轉染綠色熒光白蛋白(GFP),轉染24小時后觀察轉染效果,LipoFectMax?轉染效率(左圖)比LipoFectamine®2000(右圖)高5倍。LipoFectMax?轉染試劑轉染試劑操作流程細胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine®2000及LipoFectamine®3000分別對A549細胞進行轉染操作,通過計算轉染后的細胞存活率比較細胞毒性.CycloFect轉染試劑,你了解多少?動物細胞轉染試劑報價
用 LipoD293? 體外 DNA 轉染試劑(Ver. II)(上圖)和受歡迎的品牌產品 Invitrogen 公司的 293fectin?(下圖)轉染 pEGFP-C1 質粒到 HEK293 細胞中。轉染 24 小時后,細胞的尼康 Eclipse 熒光顯微鏡 DIC 成像圖(左側)和熒光成像圖(右側)。
對懸浮 HEK293F 產生蛋白質效率的比較/
30 毫升的 293F 細胞分別使用 LipoD293?試劑、293fectin、Xfect 和 Fugene 6 等轉染試劑按照生產商的標準轉染步驟將 pEGFP-6xHis 質粒導入細胞表達,用量為 LipoD293? 試劑,20 微克,所有其他三種轉染試劑均使用 30 微克質粒 DNA。 病毒轉染試劑原理用了這個轉染試劑,慢***再也不用怕轉不進去了!
.在多種不同類型細胞中基因敲除效率超過90%。
2.高靈活應用, 同一試劑可用于siRNA和質粒共轉染的基因沉默實驗。
3.細胞毒性低,結果相關性好,確保所觀察到的細胞效應是由轉染的siRNA而非轉染過程本身介導。
4.兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,轉染前后均無需換液(如無血清培養(yǎng)基)。
圖4. X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent用于4種細胞系的HPRT基因沉默實驗。根據(jù)各試劑說明書建議的操作流程,或標準實驗方法,將100nM HPRT特異性siRNA轉染至4種細胞。 通過LightCycler® h-HPRT Housekeeping Gene Set的熒光定量法評估基因沉默效率。結果顯示用羅氏這款試劑在四種細胞中轉染后基因沉默表現(xiàn)均表現(xiàn)優(yōu)異。
基于磷酸鈣成分的轉染試劑,其主要作用原理是與DNA通過沉淀反應形成磷酸鈣-DNA復合物,粘附到細胞膜表面,借助內吞作用進入細胞質。pH值,鈣離子濃度,DNA濃度,沉淀時間,細胞孵育時間乃至各組分加入順序都可能對結果產生影響,因此實驗條件摸索和優(yōu)化時間較長,且重復性不佳。基于脂質體的轉染試劑包括中性脂質體和陽離子脂質體兩種。中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。目前應用比較***的是帶正電的陽離子脂質體轉染試劑,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入細胞。此方法操作簡單,重復性好,在體外轉染中有很高的效率,但具有一定的細胞毒性,可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響,需要去除血清。轉染的細胞類型可簡單分為兩大類,連續(xù)細胞系和原代細胞。
圖5.Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的siRNA在單次靜脈注射后可在肝臟中引起劑量反應的敲低現(xiàn)象。Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的劑量進行注射。隨后分離血清并檢測FVII蛋白的水平(Biophen顯色檢測)。持續(xù)敲低能力在單次注射后可觀察到更長的敲低時間圖6.使用三種不同濃度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究劑量效應。siRNA分子與Invivofectamine3.0試劑形成復合物后分別以1、0.5、及0.25mg/kg的劑量進行注射。在第2、5、9、16、23及30日收集血清,并使用顯色法對血清進行分析以確定FVII蛋白的敲低效果。低毒性該試劑可將RNA導入多種細胞系,包括原代細胞和懸浮細胞.核酸轉染試劑價格
用于siRNA的轉染試劑,還有通用型轉染試劑Lipofectamine?.動物細胞轉染試劑報價
基于陽離子聚合物的轉染試劑,帶正電的聚合物與核酸帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用,并通過內吞作用進入細胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類,前者細胞毒性相對較大,后者細胞毒性較小,但其轉染效率都高于脂質體轉染,適用也較為廣范。以上單一成分的轉染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細胞毒性,可謂魚和熊掌不可兼得也。新一代轉染試劑,不局限于單一成分,混合了不同 配方的脂類(非脂質體)、加上蛋白質組分、以及各種的 成分,兼具了轉染效率高和細胞毒性小的優(yōu)勢,且操作更加簡單,易于高通量。動物細胞轉染試劑報價
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