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來源: 發(fā)布時間:2022-11-10

在難轉染細胞(原代大鼠動脈平滑肌細胞)轉染效率的比較圖片由芝加哥大學肺和重癥護理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動脈平滑肌原代細胞并用使用LipoD293?試劑(左圖)和Lipofecatmine2000(L2K,右圖)分別將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產制造商的轉染操作步轉染至該細胞。轉染24小時后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測GFP熒光,以此來評價轉染效率。對難轉染細胞LNCap細胞轉染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所(RoswellCancerInstitute)的LynGao博士友情提供賽默飛提供了多種高質量的轉染產品,適用于各種細胞類型的轉染。上海病毒轉染試劑推薦

細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中**常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內。目前主要有三種主流方法:生物轉染,物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用***等微生物作為基因導入載體,以慢***、腺***和腺相關***等**常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因***,無論哪一種都需要特定的設備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都很性感電轉化化學轉染方法是生物醫(yī)學研究中**常用的轉染方法,主要包括兩類:陽離子脂質體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學分子與帶有負電荷的核酸通過正負電荷作用形成穩(wěn)定的復合物。上海蛋白轉染試劑盒臨床級******毒載體生產必備轉染試劑..

轉染48小時后,使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進行成像(左側四幅圖),A:LipoD293;B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene6.帶有6xHis標記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術實現(xiàn)分離。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進行Coomassie亮藍染色(右上圖E),道1為LipoD293293、道2為標準蛋白分子、道3為Xfect、道4為293fectin和道5為Fugene6。這四種轉染試劑產生蛋白質的效率被進一步定量(見右下圖F)。產生慢***的比較通過LipoD293?試劑(升級版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個cDNAs共轉染進293T細胞。一個GFP載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來測定慢***的滴度。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細胞,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1微升(上圖)和10微升(下圖)。

用LipoD293?體外DNA轉染試劑(Ver.II)(上圖)和受歡迎的品牌產品Invitrogen公司的293fectin?(下圖)轉染pEGFP-C1質粒到HEK293細胞中。轉染24小時后,細胞的尼康Eclipse熒光顯微鏡DIC成像圖(左側)和熒光成像圖(右側)。對懸浮HEK293F產生蛋白質效率的比較30毫升的293F細胞分別使用LipoD293?試劑、293fectin、Xfect和Fugene6等轉染試劑按照生產商的標準轉染步驟將pEGFP-6xHis質粒導入細胞表達,用量為LipoD293?試劑,20微克,所有其他三種轉染試劑均使用30微克質粒DNA。轉染復合物制備完成; 混勻后室溫下孵育15-20分鐘,直接取10μL加入已鋪好細胞的孔中.

基于磷酸鈣成分的轉染試劑,其主要作用原理是與DNA通過沉淀反應形成磷酸鈣-DNA復合物,粘附到細胞膜表面,借助內吞作用進入細胞質。pH值,鈣離子濃度,DNA濃度,沉淀時間,細胞孵育時間乃至各組分加入順序都可能對結果產生影響,因此實驗條件摸索和優(yōu)化時間較長,且重復性不佳?;谥|體的轉染試劑包括中性脂質體和陽離子脂質體兩種。中性脂質體是利用脂質膜包裹DNA,借助脂質膜將DNA導入細胞膜內。目前應用比較***的是帶正電的陽離子脂質體轉染試劑,DNA并沒有預先包埋在脂質體中,而是帶負電的DNA自動結合到帶正電的脂質體上,形成DNA-陽離子脂質體復合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經過內吞被導入細胞。此方法操作簡單,重復性好,在體外轉染中有很高的效率,但具有一定的細胞毒性,可能會干擾細胞的代謝。且活性受血清影響,需要去除血清。mRNA細胞&***轉染試劑來助力.上海細胞轉染試劑價格

連續(xù)細胞系具有無限增殖的潛能,通常要比原代或有限細胞更易處理.上海病毒轉染試劑推薦

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