將膠質瘤干細胞（3×105）接種至6孔板中，然后使用riboFECTCP轉染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉染進膠質瘤干細胞（DP3321、DP7857）中，48h后，qRT-PCR和westernblots檢測siRNA***效率。結果發(fā)現DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為46.32％、49.71％和43.64％，DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達水平分別為53.21％、47.46％和46.31％。將1.25μlTREM-1siRNA（20μm）和3μlriboFECTTMCPRegent在30μlriboFECTTMCPBuffer中混合以產生轉染混合物。然后將混合物加入DMEM（siRNA濃度：50nM）中，與原代小膠質細胞培養(yǎng)48h。RT-PCR和westernblot分析檢測轉染效率。結果發(fā)現轉染TREM-1siRNA后******了OGD誘導的TREM-1、p-SYK、SYK、CARD9、p-p65和NLRP3的上調。轉染后6h觀察細胞狀態(tài)，并更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細胞，用PBS洗滌3次以上，以備RNA抽提。北京engene轉染試劑

細胞轉染如果以上都沒有問題，那么******重要的環(huán)節(jié)就是慢***質粒轉染293T細胞了，轉染效果直接影響著出毒效率，那么一款好的轉染試劑在此時就是至關重要了！在這里給大家推薦一款性價比超高的轉染試劑，美國Polysciences家的PEIMAX40K！PEIMAX40K（也稱為游離堿PEI22K）是一種功能強大，值得信賴且經濟高效的瞬時轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統(tǒng)中，能在96孔板至100L生物反應器范圍內提供始終如一高效的基因表達。越來越多的研究人員和公司使用PEI來替代其他類型轉染試劑，以獲得他們所需要的優(yōu)勢。相較于其他類型轉染試劑，使用自行制備的PEI轉染試劑可以使總轉染成本降低高達40％左右。ThomasM，etal（2005）研究數據表明，去乙?；腜EI40000（PolyethylenimineMAX40000）體外質粒DNA轉染效率提高21倍，小鼠體內靶向效率達到10000倍，隨之肺部特異療效顯示增強1500倍。浙江轉染試劑是哪些物質CycloFect轉染試劑,你了解多少?

X-tremeGENE9DNA轉染試劑簡介：X-tremeGENE9DNA轉染試劑是脂質和其它成分混合而得的一類多組份試劑，溶于80%乙醇中，經0.2μm濾膜過濾，然后封裝于玻璃小瓶中，適用于細胞分析的多種實驗。優(yōu)勢：1.具有細胞毒性極低、轉染后細胞存活率高，生成可信任的生理學相關數據。2.操作簡便、節(jié)省時間，只需對X-tremeGENE9DNA轉染試劑進行簡單稀釋，再與質粒DNA共同孵育，即可直接向細胞添加反應混合物(有無血清均可)。3.對于常用細胞無需進行費時費力的優(yōu)化工作.

原代細胞直接分離自組織并在適當條件下增殖。因此，它們的形態(tài)學和生理特征和體內狀態(tài)更為相似。但相對于連續(xù)細胞系，它們通常更難培養(yǎng)和轉染。在經過***次傳代培養(yǎng)之后，原代培養(yǎng)物變成了一種細胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細胞系具有有限的壽命（即它們是有限細胞系），且隨著傳代的進行，具有比較高的生長能力的細胞逐漸占據支配地位，從而造成了細胞群內的基因型和表型接近一致的情形。相對來說，這一類細胞要比原代細胞使用起來更為方便，尤其是穩(wěn)定轉染的克隆傳代。 我們希望把mRNA轉染進入原代細胞，那**適合的轉染產品就是Lipofectamine MessengerMAX?或是Neon電轉儀。

胞因素用低代數的細胞293T細胞非常重要?。‘斎灰惨ＷC細胞狀態(tài)特別好，沒有細微污染，鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細胞才可以產生較高滴度的***哦！

載體系統(tǒng)在實驗中**常見的慢***載體系統(tǒng)有三質粒系統(tǒng)、四質粒系統(tǒng)，當然使用三質粒系統(tǒng)的小伙伴居多，一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)！載體構建和質粒抽提純化我們要注意是否構建時導致質粒載體重組或某個部件缺失，或污染別的質粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時做陰性對照的習慣：建議目的基因載體和陰性對照GFP 載體是同一批，且建議每次包裝都如此操作，要保證目的基因的表達載體構建純化良好，質粒間比例得當，并且對質粒進行酶切驗證. 將EntransterTM-R4000稀釋液和agomir稀釋液充分混合.買轉染試劑配好放多少錢

采用siRNA轉染試劑可以將siRNA輕松導入細胞內。北京engene轉染試劑

圖2.采用LipofectamineRNAiMAX轉染試劑轉染A549細胞時，實現了比較好的基因***效果和比較低的細胞毒性。試驗采用的LipofectamineRNAiMAX試劑劑量范圍為0.1μL-1.0μL之間，在維持優(yōu)良的細胞活力的同時，實現了p53基因表達水平的有效敲低.功能多樣簡便的實驗方案，易于針對***的細胞系進行優(yōu)化Invivofectamine?3.0Reagent突破性的體內轉染試劑Invivofectamine3.0試劑是一種突破性的體內RNAi輸送試劑，可大幅改善實驗性能，使用微克級的siRNA即可達到高達85%的敲低效果。北京engene轉染試劑

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