外泌體鑒定:外泌體分離之后,需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法:簡(jiǎn)稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察,即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法:簡(jiǎn)稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測(cè):外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;細(xì)胞質(zhì)蛋白,如肌動(dòng)蛋白(Actin)和鈣磷脂結(jié)合蛋白(Annexins);外泌體的提取、分離方法:超高速離心法。廣州正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體與免疫系統(tǒng):不同的細(xì)胞來源的外泌體,包括免疫細(xì)胞(B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞)、病細(xì)胞、上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞,釋放出帶有載體的外泌體,可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細(xì)胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細(xì)胞可直接或間接地受到外泌體的影響,刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用。體外培養(yǎng)心血管疾病的細(xì)胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān);體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的外泌體具有保護(hù)心血管的作用。這些發(fā)現(xiàn)表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA,蛋白等物質(zhì)改變受體細(xì)胞的代謝狀態(tài)。外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無創(chuàng)診斷重慶外泌體提取試劑直銷廠家通過離心篩選初步去除體液中的細(xì)胞成分和細(xì)胞碎片,制成體液樣本備用。
外泌體:該研究主要是做了牡蠣基因組測(cè)序,并揭示其應(yīng)激適應(yīng)和殼結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。其中涉及,所鑒定的259種殼蛋白中的84%不是經(jīng)典分泌蛋白;它們可能是細(xì)胞的一部分或被外泌體沉積而來。259個(gè)殼蛋白中的61個(gè)與外泌體數(shù)據(jù)庫(kù)中的蛋白質(zhì)匹配,支持了外泌體的存在。在礦化前緣處觀察到含有方解石晶體的細(xì)胞和外泌體樣囊泡,盡管它們?cè)跉ば纬芍械闹匾允怯袪?zhēng)議的。這項(xiàng)研究為它們?cè)跉?nèi)的存在及其可能參與殼形成提供了分子證據(jù)。Hedgehog(Hh)蛋白的保守家族作為短距離和長(zhǎng)距離分泌的形態(tài)發(fā)生素,在胚胎發(fā)育過程中控制組織構(gòu)型和分化。成熟的Hh攜帶疏水性棕櫚酸和對(duì)其細(xì)胞外擴(kuò)散至關(guān)重要的膽固醇修飾。
外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等,然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法,由于離心步驟繁瑣,費(fèi)事費(fèi)力,而且步驟多導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)中容易污染,且損耗量大,使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對(duì)于抽提細(xì)胞上清來說,更是極為不請(qǐng)便,試想用提取300ml的上清需要6個(gè)50ml離心管,無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀,都具有操作極其不便的缺點(diǎn),總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會(huì)堵塞膜孔,造成濃縮效率低,濃縮管重復(fù)利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會(huì)粘連成團(tuán),造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差,對(duì)于后續(xù)實(shí)驗(yàn)也有影響。外泌體的提取、分離方法:梯度密度離心法。
外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):純化和富集的完整血漿/血清,尿液和細(xì)胞培養(yǎng)基中外泌體的可用于功能研究;樣本輸入量多樣;無需耗時(shí)的超速離心,過濾或特殊注射器;無需沉淀試劑,也無需過夜培養(yǎng);無需蛋白酶處理;適用于多種物種;外泌體被純化并且不含任何其他RNA結(jié)合蛋白;可以使用NanoSight®或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評(píng)估近似外泌體大小范圍和濃度。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的直徑大約為30~150nm的具有脂質(zhì)雙層膜的微小膜泡。它普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子,形成了一種全新的細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。太原外泌體提取試劑直銷廠家
外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):樣本輸入量多樣。廣州正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體(exosomes,Exos)是細(xì)胞分泌的一種膜囊泡,因其可以將供體細(xì)胞的信息通過其攜帶的蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等傳遞到受體細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞之間的信息交流及物質(zhì)交換,并且可以作為藥物載體轉(zhuǎn)運(yùn)藥物而引起科學(xué)家的普遍關(guān)注(Fig1)。外泌體作為內(nèi)源性的天然藥物載體有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì),表面由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成,使其可以穿透許多生物膜,提高藥物的運(yùn)輸效率和靶向性,可以穩(wěn)定存在于血液中,納米級(jí)尺寸明顯增強(qiáng)藥物在瘤部位的滲透滯留效應(yīng)(permeabilityandretentioneffect,EPR)。目前,許多抗藥物、基因藥物及藥物均被成功載入外泌體。但是由于沒有較好的外泌體分離純化和載藥的方法,使得其作為藥物載體的應(yīng)用受到限制。廣州正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家