SYBR Green I染料試劑：SYBR Green I染料法采用了Applied Biosystems SYBR Green I染料，一種可以在PCR循環(huán)過程中隨著PCR產(chǎn)物的累計而對其進行檢測的高度特異性雙鏈DNA結合染料。TaqMan和SYBR Green I染料法為重要的區(qū)別在于SYBR Green I染料試劑可以檢測所有雙鏈DNA，包括非特異性的反應產(chǎn)物。因此這樣經(jīng)過特別優(yōu)化的反應體系，對于獲取準確的結果而言是非常必要的。使用SYBR Green I染料法的檢測類型SYBR Green I染料法可用于以下檢測類型：用于RNA定量的一步法RT-PCR；用于RNA定量的兩步法RT-PCR；DNA/cDNA定量。熒光檢測系統(tǒng)可接收熒光信號，每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，熒光信號累積和PCR產(chǎn)物形成是同步。佛山單通道qPCR儀型號

q225 加樣孔板側壁和金屬熱塊能夠嚴密貼合，使液體樣品迅速達到設定溫度，從而減少實驗時間。右上為 q225 在一次40 個循環(huán)的常規(guī)qPCR 實驗內加熱塊溫度變化情況，在整個實驗過程中金屬塊升降溫迅速且溫度穩(wěn)定，不受機器本身隨實驗時間延長而內部背景溫度上升的影響。qPCR 反應所需時間很大程度上取決于對反應溶液進行變溫所需要的時間，而這一過程又受到加熱塊升降溫速度和液體升降溫速度兩方面的影響。q225 所使用的熱循環(huán)系統(tǒng)峰值變溫速率可達4°C/s，更重要的是，經(jīng)過精密設計的加熱塊能夠很大程度地貼合孔板形狀，實現(xiàn)高效的熱傳導，使得在加熱塊達到預定溫度后反應溶液也能在短時間內達到相同溫度，反應溶液溫度更為均一。q225 出色的熱循環(huán)系統(tǒng)設計使得40 個循環(huán)的常規(guī) qPCR 可以在短短43 分鐘內輕松完成，讓您的工作效率獲得質的提升 。SNP基因分型SNP分型用HRM高分辨熔解曲線方法來做，速度快，效率高。在進行大量SNP標記分型時無需合成熒光探針和熒光引物?？梢缘墓?jié)省實驗成本。佛山單通道qPCR儀型號qPCR擴增效率100%的理想條件下的PCR反應，PCR產(chǎn)物量呈指數(shù)倍增長Yn=Y0×2^n。

內標在傳統(tǒng)定量中的作用：由于傳統(tǒng)定量方法都是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經(jīng)過對數(shù)期擴增到達平臺期時，檢測重現(xiàn)性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復實驗，所得結果有很大差異，因此無法直接從終點產(chǎn)物量推算出起始模板量。加入內標后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。3．內標對定量PCR的影響：若在待測樣品中加入已知起始拷貝數(shù)的內標，則PCR反應變?yōu)殡p重PCR，雙重PCR反應中存在兩種模板之間的干擾和競爭，尤其當兩種模板的起始拷貝數(shù)相差比較大時，這種競爭會表現(xiàn)得更為***。但由于待測樣品的起始拷貝數(shù)是未知的，所以無法加入合適數(shù)量的已知模板作為內標。也正是這個原因，傳統(tǒng)定量方法雖然加入內標，但仍然只是一種半定量的方法。

1983年，美國化學家Kary Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應技術(polymerase chain reaction， PCR)，這一技術將DNA聚合酶的特性結合核酸雙鏈的變性復性特性，采用適溫延伸、高溫變性以及低溫復性，讓目的核酸片段實現(xiàn)了特異性體外擴增，可將極微量的目標DNA特異地擴增上百萬倍，從而提高對DNA分子的分析和檢測靈敏度。尤其是耐熱DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)，更是極大地促進了PCR技術在分子生物學科研，及臨床分子診斷領域的廣泛應用。常用的 PCR 技術包括逆轉錄PCR（Reverse Transcription PCR，RT-PCR）和實時熒光定量PCR（Real-time Quantitative PCR，qPCR）等。PCR的種類根據(jù)化學發(fā)光原理可以分為：SYBR染料法和TaqMan探針法。

染色質片段化——DN段化:細胞核材料片段化是獲得良好的ChIP 分辨率的關鍵因素，理想情況下的片段大小在 200 到 800 bp對之間。剪切是難控制的步驟之一。通過超聲處理和/或核酸酶/酶促消化可以實現(xiàn)剪切，各有利弊。超聲處理需要大量的手動操作時間，但非常適合難以裂解的細胞；酶促消化不需要手動操作，適用于大量樣品的處理，但其剪切位點不是隨機的。兩種方法都需要根據(jù)具體細胞系進行優(yōu)化。注意：此時可以停止ChIP。經(jīng)過剪切/消化染色質后，可以將樣品于-80°C儲存。避免反復凍融。qpcr在擴增每個循環(huán)中模板DNA通過變性、復性、延伸三個階段形成更多的子代DNA，為下一個循環(huán)提供模板DNA。佛山單通道qPCR儀型號

SYBR Green是一種DNA插入染料用于qPCR。雖然SYBR Green方法比探針方法便宜，但是特異性沒有熒光探針方法好。佛山單通道qPCR儀型號

免疫沉淀——捕獲并分離蛋白質-DNA復合物使用抗體捕獲蛋白質-DNA復合物中的目標蛋白質是實驗成功的關鍵因素?？贵w免疫沉淀并從細胞核組分中分離蛋白質，去除不相關的細胞物質。使用抗體結合磁珠完成所得抗體-蛋白質-DNA復合物的純化。經(jīng)過孵育后，充分洗滌磁珠-抗體-蛋白質-DNA復合物，純化并洗脫蛋白質-DNA復合物。制備DNA——解交聯(lián)和DNA純化:現(xiàn)在含有目標蛋白質的染色質片段已分離，需要解交聯(lián)并純化DNA。解交聯(lián)通常采用高熱孵育和/或消化來完成。注意：此時可以停止ChIP。經(jīng)過解交聯(lián)和/或DNA純化后，可以將樣品于-20°C儲存。佛山單通道qPCR儀型號

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