逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成。此過程中，核酸合成與轉(zhuǎn)錄（DNA到RNA）過程與遺傳信息的流動(dòng)方向（RNA到DNA）相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄與反轉(zhuǎn)錄嚴(yán)格意義上來說沒有什么區(qū)別，但是逆轉(zhuǎn)錄是某些病毒的自主行為，如逆轉(zhuǎn)錄病毒，它們在整合到宿主細(xì)胞內(nèi)前以RNA為模板形成DNA的過程；反轉(zhuǎn)錄是進(jìn)行基因工程過程中，人為地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之為模板人工合成DNA的過程。二者雖同為RNA→DNA的過程，但地點(diǎn)不同，相對性的來說，逆轉(zhuǎn)錄在體內(nèi)，反轉(zhuǎn)錄在體外。逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)可以進(jìn)行從RNA到DNA的轉(zhuǎn)化，從而保護(hù)RNA序列的完整性。深圳帶gDNA Remover反轉(zhuǎn)錄

M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶比AMV反轉(zhuǎn)錄酶缺乏連續(xù)性，因此要獲得像AMV反轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)中產(chǎn)生同樣量的cDNA就要求使用較多單位的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶。用1微克的mRNA起始合成首先條鏈的cDNA，要用8單位的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶才相當(dāng)于1單位的AMV反轉(zhuǎn)錄酶的作用。該酶很容易被亞精胺(Spermidine)所抑制，該酶非常不能用Promega的RiboprobeAMV反轉(zhuǎn)錄酶5X反應(yīng)緩沖液，也不能用Promega的RiboclonecDNA首先條鏈緩沖液，因?yàn)檫@二種緩沖液均含有亞精胺。逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)可以選擇加入RNA合成抑制劑RNAse防止RNA降解和污染，逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)過程需適當(dāng)?shù)腞NA質(zhì)量，過少或質(zhì)量不佳將影響擴(kuò)增效果。上海miQP2反轉(zhuǎn)錄純度高逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)過程中要使用干燥無菌的管頭和標(biāo)本采集器避免受外界污染。

逆轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄過程：基因的轉(zhuǎn)錄是由RNA聚合酶催化進(jìn)行的?；虻纳嫌尉哂薪Y(jié)合RNA聚合酶的區(qū)域，叫作啟動(dòng)子。啟動(dòng)子是一段具有特定序列的DNA，具有和RNA聚合酶特異性結(jié)合的位點(diǎn)，決定了基因轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)。RNA聚合酶與啟動(dòng)子結(jié)合后，在特定區(qū)域?qū)NA雙螺旋兩條鏈之間的氫鍵斷開，使DNA解旋，形成單鏈區(qū)，以非編碼鏈為模板合成RNA互補(bǔ)鏈的過程就開始了。轉(zhuǎn)錄的延長是以前面核苷酸的3′-OH為基礎(chǔ)逐個(gè)加入NTP，形成磷酸二酯鍵，使RNA逐步從5′向3′端延伸的過程。在原核生物中，因?yàn)闆]有核膜的分隔，轉(zhuǎn)錄未完成即已開始翻譯，而且在同一個(gè)DNA模板上同時(shí)進(jìn)行多個(gè)轉(zhuǎn)錄過程。電鏡下看到的羽毛狀圖形和羽毛上的小黑點(diǎn)（多聚核糖體），是轉(zhuǎn)錄和翻譯高效率的直觀表現(xiàn)。

逆轉(zhuǎn)錄是指以RNA為模板合成與其互補(bǔ)的cDNA的過程。逆轉(zhuǎn)錄PCR是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄(reversetranscription)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)相結(jié)合的技術(shù)，故逆轉(zhuǎn)錄稱為RT-PCR或反轉(zhuǎn)錄PCR。逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)原理是，提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以RNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA鏈為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而獲得大量拷貝。逆轉(zhuǎn)錄PCR的出現(xiàn)使RNA檢測的靈敏性提高了幾個(gè)數(shù)量級(jí)，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。RNA逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：選擇合適的引物：隨機(jī)引物法逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的片段較小，很難得到全長轉(zhuǎn)錄本的cDNA。單獨(dú)選擇某一種引物，實(shí)驗(yàn)可能都不完美，具體需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩泶_定。逆轉(zhuǎn)錄可改變RNA的信息內(nèi)容，為研究RNA功能提供基礎(chǔ)。

RT-PCR就是逆轉(zhuǎn)錄PCR或稱為反轉(zhuǎn)錄PCR（Reversetranscription-PCR，RT-PCR），是以RNA為材料應(yīng)用于PCR擴(kuò)增中的一種實(shí)驗(yàn)方法。首先通過逆轉(zhuǎn)錄酶將總RNA或信使RNA（mRNA）轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA）。其次TaqDNA聚合酶以cDNA為模板進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。RT-PCR已被普遍應(yīng)用于多種分子生物學(xué)應(yīng)用中，包括基因表達(dá)分析、基因測試、RNA干擾驗(yàn)證檢測、微陣列驗(yàn)證、病原體檢測和疾病研究。RT-PCR的方法之一步法和兩步法：RT-PCR其操作方法分為兩種，即一步法和兩步法。一步法RT-PCR，逆轉(zhuǎn)錄同PCR擴(kuò)增結(jié)合在一起，即cDNA合成與PCR擴(kuò)增反應(yīng)在同一管Buffer及酶中進(jìn)行，一步完成。兩步法RT-PCR，RNA首先在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下生成cDNA，再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分成兩步進(jìn)行。逆轉(zhuǎn)錄PCR在檢測病毒、診斷疾病等方面有普遍應(yīng)用。深圳帶gDNA Remover反轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)過程中避免光照，防止RNA樣品和試劑受光降解或刺激。深圳帶gDNA Remover反轉(zhuǎn)錄

莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)具有許多優(yōu)點(diǎn)。首先，該技術(shù)可以在樣品數(shù)量較少的情況下擴(kuò)增RNA分子，從而避免了RNA樣品的純化和濃縮操作。其次，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)可以特異性地?cái)U(kuò)增目標(biāo)RNA分子，避免了隨機(jī)引物引起的非特異擴(kuò)增，從而提高了檢測的準(zhǔn)確性和可靠性。此外，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)可以擴(kuò)增RNA的全長，而不只只是RNA的片段，從而可以更全部地了解RNA的結(jié)構(gòu)和功能。莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)在分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中得到了普遍的應(yīng)用。例如，在基因表達(dá)和調(diào)控的研究中，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)可以用來研究mRNA的表達(dá)模式和在細(xì)胞內(nèi)的分布狀態(tài)。此外，在病毒學(xué)研究中，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)可以被用來檢測病毒RNA的存在和濃度。在病癥診斷和治著中，莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄技術(shù)可以用來檢測和分析病細(xì)胞中的疙瘩標(biāo)志物。深圳帶gDNA Remover反轉(zhuǎn)錄

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