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外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。二是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。外泌體可以傳遞生物分子,例如蛋白質(zhì)、DNA、mRNA等,影響接收器細(xì)胞的表現(xiàn)型和生理活性。南京血液外泌體分離價(jià)格
外泌體還參與神經(jīng)退行型癥。在神經(jīng)退行型癥個體的腦脊液和外周血中已檢測到幾種特定于阿爾茨海默氏癥、帕金森氏癥和Creutzfeldt-Jakob的聚集蛋白。特別是,在從阿爾茨海默者的腦脊液樣本中獲得的外泌體中檢測到Thr-181磷酸化的tau。在Thr-181磷酸化的Tau是阿爾茨海默的既定生物標(biāo)志物。此外,α-突觸核的蛋白也常在阿爾茨海默者的群體中檢出。此外,在尿液中發(fā)現(xiàn)的外泌體標(biāo)志物也可以是膀胱和前列腺疙瘩的標(biāo)志物。比如:視黃酸誘導(dǎo)蛋白3(GPRC5A)、抵抗素、外泌體蛋白PCA-3、TMPRSS2:ERG、α1-抗胰蛋白酶、組蛋白H2B1等。除了腦和泌尿道疙瘩外,外泌體蛋白也可以是胰腺病的標(biāo)志物。比如:結(jié)直腸病的外泌體蛋白標(biāo)志物包括EpCAM、cadherin-17、粘蛋白13(MUC-13)、角蛋白18、claudins和ephrinB1。廈門外泌體多少錢部分外泌體分離方法可能存在對外泌體結(jié)構(gòu)和元素的影響。
分離外泌體的方法之過濾:過濾方法只取決于分子量或組分的大小,并有助于獲得較佳的外泌體產(chǎn)量。超濾、凝膠過濾和靜水透析包含在外泌體分離的過濾原理下。外泌體可以根據(jù)其定義的分子量或體積排阻限,使用標(biāo)準(zhǔn)膜過濾器從其他EV組分和細(xì)胞碎片中分離出來。市售的聚偏二乙烯碳酸酯膜過濾器具有各種孔徑范圍,用于滲透、納濾和微濾應(yīng)用。分離外泌體的方法之體積排阻色譜(SEC):該方法主要有助于從分離的外泌體中去除蛋白質(zhì)和脂蛋白雜質(zhì),它已被用于從尿液和血漿蛋白中分離外泌體。它被用作超速離心和超濾的后續(xù)分離方法。瓊脂糖2B/CL4B、qEV和瓊脂丙烯酸S-400是通常用于凝膠過濾色譜分離外泌體的色譜柱。SEC可以在低壓下進(jìn)行,這有助于分離具有完整完整性的外泌體。
使用差速離心法分離外泌體主要需要注意的是轉(zhuǎn)子的選擇?!皵[動桶”(SW)轉(zhuǎn)子和“定角”(FA)轉(zhuǎn)子,這些轉(zhuǎn)子的幾何形狀根本不同,因此沉降特性也不同。這些轉(zhuǎn)子之間的主要區(qū)別在于:FA轉(zhuǎn)子,與旋轉(zhuǎn)半徑相比,沉積顆粒的較大路徑長度通常較小,允許近似恒定遷移率并簡化描述。然而,第二個區(qū)別是圓形FA管的水平橫截面是橢圓形的,不同粒子的路徑長度根據(jù)軌跡與橢圓長軸的距離而不同。由于較短的路徑長度,外面顆??赡艹两档酶?,需要根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇。外泌體的轉(zhuǎn)移涉及細(xì)胞因子、基質(zhì)降解酶和細(xì)胞外基質(zhì)重塑等多種調(diào)節(jié)步驟。
外泌體的物理表征方法:常用的外泌體物理表征方法是基于顯微鏡的方法,例如透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、低溫電子顯微鏡和原子力顯微鏡;動態(tài)光散射;納米粒子跟蹤分析;可調(diào)電阻脈沖傳感;和單個EV分析等。用于分析外泌體濃度、定量和概況的分子生物方法主要包括:實(shí)時定量PCR、數(shù)字PCR技術(shù)(基于芯片的dPCR、液滴數(shù)字PCR、ddPCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡、全基因組測序(next-generationsequencing)、exome-targetedsequencing(下一代測序)、微陣列圖譜技術(shù)和ELISA技術(shù)等。優(yōu)化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。寧波血漿外泌體分離哪家好
外泌體在疙瘩微環(huán)境中的參與,反映了其具有的高度的異質(zhì)性和復(fù)雜性。南京血液外泌體分離價(jià)格
外泌體是直徑為30-150nm的小細(xì)胞外囊泡。在生理和病理?xiàng)l件下,幾乎所有類型的細(xì)胞都可以釋放外泌體,在細(xì)胞通訊和表觀遺傳調(diào)控中發(fā)揮重要作用。外泌體天然存在于體液中,包括血液,唾液,尿液和腦脊液等,內(nèi)部含有其來源細(xì)胞的核酸,蛋白等物質(zhì),因此基于外泌體的疾病診斷和治著方法得到了深入的研究。但是如何拿到純凈的外泌體一直是外泌體研究所面臨的難題之一,因此研究人員也開發(fā)了許多外泌體分離的方法,來一起看一下吧。差速離心法:離心力從300×g到100,000×g的下進(jìn)行多次循環(huán)離心,較后收集外泌體顆粒。密度梯度離心法:等密度梯度超速離心法是通過從下到上逐步降低密度分層。動區(qū)梯度超速離心法由兩個梯度介質(zhì)部分組成,樣品根據(jù)密度/質(zhì)量/大小被依次分離。南京血液外泌體分離價(jià)格
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