逆轉(zhuǎn)錄的端粒復(fù)制：對于線性基因組，其滯后鏈的末端是無法完整復(fù)制的，每次約損失30-200個核苷酸（Cells.2020Feb22;9(2).）。這樣隨著細胞分裂，端粒會持續(xù)縮短，造成復(fù)制性衰老。對于大多數(shù)體細胞來說，端粒磨損是一種控制其分裂潛力的機制，但對于需要多次增殖的干細胞來說，必須設(shè)法維持端粒長度。端粒酶（telomerase）可以通過逆轉(zhuǎn)錄過程延長端粒。端粒酶由端粒酶RNA（TERC）和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（TERT）組成。TERT使用TERC作為模板，在染色體的單鏈末端合成端粒DNA的重復(fù)序列。大多數(shù)體細胞缺乏端粒酶活性，因而容易衰老。但未分化的生殖細胞，干細胞，活化的淋巴細胞和大多數(shù)疙瘩細胞具有高水平的端粒酶活性，可以克服端粒磨損并維持無限的細胞分裂。高效的逆轉(zhuǎn)錄體系可提高反應(yīng)效率和檢測靈敏度。成都彩色反轉(zhuǎn)錄制造商

反轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscriptase,也可寫成逆轉(zhuǎn)錄酶)又稱為依賴RNA的DNA聚合酶。1970年Temin等在致死RNA病毒中發(fā)現(xiàn)了一種特殊的DNA聚合酶，該酶以RNA為模板，以dNTP為底物，tRNA(主要是色氨酸t(yī)RNA)為引物，在tRNA3'-OH末端上，根據(jù)堿基配對的原則，按5'-3'方向合成一條與RNA模板互補的DNA單鏈，這條DNA單鏈叫做互補DNA(complementaryDNA，CDNA)。反轉(zhuǎn)錄酶（Reversetranscriptase）是以RNA為模板指導(dǎo)三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA（cDNA）的酶。哺乳類C型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶和鼠類B型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶都是一條多肽鏈。鳥類RNA病毒的反轉(zhuǎn)錄酶則由兩上亞基結(jié)構(gòu)。真核生物中也都分離出具有不同結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄酶。成都莖環(huán)法逆轉(zhuǎn)錄酶生產(chǎn)廠家逆轉(zhuǎn)錄實驗前要對反應(yīng)體系進行無RNA和無反轉(zhuǎn)錄酶的對照。

逆轉(zhuǎn)錄實驗的準備工作：1、實驗器具與材料：（1）移液頭：200ul、10ul；（2）吸頭：200ul、20ul；（3）EP管1。5ml、100ul；（4）水浴箱。2、實驗器具的處理與準備，塑料制品：（包括吸頭、EP管等）將塑料制品逐個浸泡于1‰DEPC水中（必要時小頭頭需要用吸管打入DEPC水）37℃過夜，然后送至高壓3次，后在80℃烘烤箱中烘干（或置于37℃中8小時左右烘干），試驗前將頭頭放入吸頭臺。3、試劑配制和準備：（1）DEPC水：泡實驗器具的DEPC水的配制：1000ml雙蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中靜置4小時后備用。逆轉(zhuǎn)錄中所用的DEPC水的配制：100ml鹽水瓶內(nèi)裝40ml雙蒸水，加40ulDEPC，37℃過夜，送至高壓，后分裝到幾個1。5mlEP管中，-20℃中保存?zhèn)溆?。?）RT中所需要的各種試劑。

逆轉(zhuǎn)錄試劑是一類普遍應(yīng)用于生物學和醫(yī)學研究的試劑，它們可以用于逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的實驗操作。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)是將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA的過程，與正常的DNA轉(zhuǎn)錄成RNA的過程相反。逆轉(zhuǎn)錄試劑可以促進這個過程的進行，從而使得研究人員能夠更好地了解RNA的結(jié)構(gòu)和功能。逆轉(zhuǎn)錄試劑通常由逆轉(zhuǎn)錄酶、緩沖液和酶的輔助因子組成。逆轉(zhuǎn)錄酶是一種酶類蛋白質(zhì)，它可以在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中起到關(guān)鍵的作用。緩沖液的主要作用是維持反應(yīng)體系的PH值和離子強度，從而保證逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的順利進行。酶的輔助因子（如酶抑制劑）則可以幫助研究人員減少誤差和提高實驗的可重復(fù)性。逆轉(zhuǎn)錄實驗過程中要注意RNA樣品的保存、純化、處理和轉(zhuǎn)錄酶的選擇。

反轉(zhuǎn)錄酶的用處：由它催化轉(zhuǎn)錄合成的DNA稱為互補DNA(cDNA)。通常情況下，細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄應(yīng)由DNA到RNA的，所得RNA為信使RNA（mRNA）供蛋白質(zhì)合成作模板用。而在部分RNA病毒中，要實現(xiàn)自身擴增，必須具有DNA，因此先由RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA再由cDNA轉(zhuǎn)錄出RNA。逆轉(zhuǎn)錄酶可用RT—PCR，將RNA轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA后擴增，以獲得RNA的序列。1970年從致死RNA病毒中發(fā)現(xiàn)了反轉(zhuǎn)錄酶，并認為此酶與病毒的致死性質(zhì)有關(guān)。反轉(zhuǎn)錄酶也分布于某些正常細胞和胚胎細胞。反轉(zhuǎn)錄酶的發(fā)現(xiàn)表明不能把生物的遺傳信息由DNA→mRNA→蛋白質(zhì)非?；?，遺傳信息也可以從RNA傳遞到DNA。它促進了分子生物學、生物化學和病毒學的研究，已成為研究這些學科的有力工具。酵母菌逆轉(zhuǎn)錄酶是逆轉(zhuǎn)錄酶家族中的一個重要表示。成都一體化反轉(zhuǎn)錄試劑研發(fā)

逆轉(zhuǎn)錄PCR在檢測病毒、診斷疾病等方面有普遍應(yīng)用。成都彩色反轉(zhuǎn)錄制造商

反轉(zhuǎn)錄酶的選擇：反轉(zhuǎn)錄酶（Reversetranscriptase）又稱逆轉(zhuǎn)錄酶。是以RNA為模板指導(dǎo)dNTP合成互補DNA（cDNA）的酶。一部分反轉(zhuǎn)錄酶具有RNA酶活性，能夠在轉(zhuǎn)錄后降解RNA-DNA雜交鏈中的RNA鏈。如果反轉(zhuǎn)錄酶沒有Rnase酶活性，可加入RNaseH來獲得更高的qPCR效率。常用的酶包括Money鼠白血病病毒（MMLV）反轉(zhuǎn)錄酶和禽成髓細胞瘤病毒（AMV）反轉(zhuǎn)錄酶。依據(jù)RT-PCR，理想的狀態(tài)下是選擇具有較高熱穩(wěn)定性的反轉(zhuǎn)錄酶，cDNA的合成才能在較高的溫度下進行，確保成功轉(zhuǎn)錄具有較高二級結(jié)構(gòu)的RNA，并確保在整個反應(yīng)過程中的全部活性，從而得到質(zhì)量更高的cDNA。成都彩色反轉(zhuǎn)錄制造商

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