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來源: 發(fā)布時間:2025-05-02

探針的標記方式有放射性標記和非放射性標記。標記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標記同位素,被標記的dNTP本身就帶有磷酸基團,便于標記。特點是比活性高,可達9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線能量高。用它標記的探針自顯影時間短,靈敏度高。32P的半壽期短,雖使用不方便,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標記法有酶標法和化學物標記法。酶標方法與免疫測定ELISA方法相似,只是被標記的核酸代替了被標記的抗體,事實上被標記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素、地高辛標記的。為此,一般也采用鎢絲熱發(fā)射電子槍和2-3個聚光鏡的結(jié)構(gòu)。青浦區(qū)優(yōu)勢探針售價

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③末端標記法(又叫尾標)。利用末端轉(zhuǎn)移酶可進行“尾標”,尾標適用于寡核苷酸探針標記,寡核苷酸探針多用于核酸“點”突變的檢測,該探針可用核酸合成儀人工合成,克隆出的探針一般較長,特異性好,標記量大,雜交的檢出信號強。探針合成的注意事項①合成探針的長短,一般在20~50個核苷酸之間。合成過長成本高,且易出現(xiàn)聚合酶合成錯誤,雜交時間長,合成太短則特異性下降。②堿基組成G-C應(yīng)含40%~60%,一種堿基連續(xù)重復(fù)不超過4個,以免非特異性雜交產(chǎn)生。③探針自身序列內(nèi)應(yīng)無互補區(qū)域,以免產(chǎn)生“發(fā)夾”結(jié)構(gòu),影響雜交。總之,一個好的探針**終要在實踐中才能加以確認。長寧區(qū)品牌探針推薦貨源通過鑒別其特征波長或特征能量就可以確定所分析的元素。

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該系統(tǒng)為電子探針分析提供具有足夠高的入射能量,足夠大的束流和在樣品表面轟擊殿處束斑直徑近可能小的電子束,作為X射線的激發(fā)源。為此,一般也采用鎢絲熱發(fā)射電子槍和2-3個聚光鏡的結(jié)構(gòu)。 為了提高X射線的信號強度,電子探針必須采用較掃描電鏡更高的入射電子束流(在10-9-10-7A范圍),常用的加速電壓為10-30 KV,束斑直徑約為0.5μm。電子探針在鏡筒部分與掃描電鏡明顯不同之處是由光學顯微鏡。它的作用是選擇和確定分析點。其方法是,先利用能發(fā)出熒光的材料(如ZrO2)置于電子束轟擊下,這是就能觀察到電子束轟擊點的位置,通過樣品移動裝置把它調(diào)到光學顯微鏡目鏡十字線交叉點上,這樣就能保證電子束正好轟擊在分析點上,同時也保證了分析點處于X射線分光譜儀的正確位置上。在電子探針上大多使用的光學顯微鏡是同軸反射式物鏡,其優(yōu)點是光學觀察和X射線分析可同時進行。放大倍數(shù)為100-500倍。

電子探針X射線顯微分析儀(簡稱電子探針)利用約1Pm的細焦電子束,在樣品表層微區(qū)內(nèi)激發(fā)元素的特征X射線,根據(jù)特征X射線的波長和強度,進行微區(qū)化學成分定性或定量分析。電子探針的光學系統(tǒng)、真空系統(tǒng)等部分與掃描電鏡基本相同,通常也配有二次電子和背散射電子信號檢測器,同時兼有組織形貌和微區(qū)成分分析兩方面的功能。電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機系統(tǒng)以外,還主要包括分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)等部分。電子探針主要由電子光學系統(tǒng)(鏡筒),X射線譜儀和信息記錄顯示系統(tǒng)組成。電子探針和掃描電鏡在電子光學系統(tǒng)的構(gòu)造基本相同,它們常常組合成單一的儀器。能進行微區(qū)分析??煞治鰯?shù)個μm3內(nèi)元素的成分。

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禽流感基因探針制備探針濃度鑒定將禽流感病毒H9N2亞型毒株**白(NP)基因3′端較為保守的、約350bp的編碼序列通過限制性內(nèi)切酶Hae¸切割、分離后,用隨機引物法制備Digoxigenin2112dUTP標記探針。測定該探針的濃度為100Lgöml。特異性試驗發(fā)現(xiàn)該探針只能與實驗室構(gòu)建的、含有NP基因的重組載體pGEM2TE2NP和pBacPAK2NP以及A型流感病毒H9N2亞型、H3N2亞型以及H9N3亞型毒株基因組RNA結(jié)合出現(xiàn)特異性的顏色反應(yīng),而與實驗室常用的載體pGEM2Teasy、pBacPAK2His3、pTARGET和pGEMEX22以及新城疫病毒、傳染***毒和傳染性喉氣管炎病毒基因組不發(fā)生反應(yīng)。應(yīng)用該探針檢測含NP基因的重組載體和重組病毒證明該探針是有效的,可用于含禽流感病毒樣品或材料的檢測??梢赃M行點、線掃描(得到層成分分布信息)、面掃描分析(得到成分面分布圖像)。青浦區(qū)優(yōu)勢探針售價

計算時應(yīng)用布拉格方程:nλ=2dsinθ。青浦區(qū)優(yōu)勢探針售價

進行分子突變需要大量的探針拷貝,后者一般是通過分子克?。╩olecular cloning)獲得的??寺∈侵赣脽o性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復(fù)制品。當制備基因組DNA探針前,應(yīng)先制備基因組文庫,即把基因組DNA打斷,或用限制性酶作不完全水解,得到許多大小不等的隨機片段,將這些片段體外重組到運載體(噬菌體、質(zhì)粒等)中去,再將后者轉(zhuǎn)染適當?shù)乃拗骷毎绱竽c肝菌,這時在固體培養(yǎng)基上可以得到許多攜帶有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通過原位雜交,從中可篩出含有目的基因片段的克隆,然后通過細胞擴增,制備出大量的探針。青浦區(qū)優(yōu)勢探針售價

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