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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2025-06-07

在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi)、原子序數(shù)4以上的所有元素;但是對(duì)原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差。常規(guī)分析的典型檢測(cè)相對(duì)靈敏度為萬(wàn)分之一,在有些情況下可達(dá)十萬(wàn)分之一。檢測(cè)的***靈敏度因元素而異,一般為10-14~10-16克。用這種方法可以方便地進(jìn)行點(diǎn)、線、面上的元素分析,并獲得元素分布的圖象。對(duì)原子序數(shù)高于10、濃度高于10%的元素,定量分析的相對(duì)精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學(xué)與電子光學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的。1948年法國(guó)的R.卡斯坦制造了***臺(tái)電子探針儀。1958年法國(guó)首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處。70年代以來(lái)生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,還能觀察和研究微觀形貌、晶體結(jié)構(gòu)等。分析對(duì)象是固體物質(zhì)表面細(xì)小顆?;蛭⑿^(qū)域,小范圍直徑為1μm。寶山區(qū)挑選探針按需定制

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體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)不斷完善,已相繼建立了單向和雙向體外轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。該系統(tǒng)主要基于一類新型載體pSP和pGEM,這類載體在多克隆位點(diǎn)兩側(cè)分別帶有SP6啟動(dòng)子和T7啟動(dòng)子,在SP6RNA聚合酶或T7RNA聚合酶作用下可以進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)錄,如果在多克隆位點(diǎn)接頭中插入了外源DNA片段,則可以此DNA兩條鏈中的一條為模板轉(zhuǎn)錄生成RNA。這種體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)效率很高,在1h內(nèi)可合成近10μg的RNA產(chǎn)生,只要在底物中加入適量的放射性或生物素標(biāo)記的NTP,則所合成的RNA可得到高效標(biāo)記。該方法能有效地控制探針的長(zhǎng)度并可提高標(biāo)記物的利用率。虹口區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針品牌電子束轟擊樣品表面將產(chǎn)生特征X射線,不同的元素有不同的X射線特征波長(zhǎng)和能量。

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值得一提的是,通過(guò)改變外源基因的插入方向或選用不同的RNA聚合酶,可以控制RNA的轉(zhuǎn)錄方向,即以哪條DNA鏈以模板轉(zhuǎn)錄RNA。這種可以得到同義RNA探針(與mRNA同序列)和反義RNA探針(與mRNA互補(bǔ)),反義RNA又稱cRNA,除可用于反義核酸研究外,還可用于檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平。在這種情況下,因?yàn)樘结樅桶行蛄芯鶠閱捂?,所以雜交的效率要比DNA-DNA雜交高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。RNA探針除可用于檢測(cè)DNA和mRNA外,還有一個(gè)重要用途,在研究基因表達(dá)時(shí),常常需要觀察該基因的轉(zhuǎn)錄狀況。

②隨機(jī)引物法。隨機(jī)引物是指含有各種可能排列順序的寡聚核苷酸片斷的混合物,因此它可以與任意核苷酸序列雜交,起到聚合酶反應(yīng)的引物作用。將待標(biāo)記的DNA探針片斷變性后與隨機(jī)引物一起雜交,然后以此雜交的寡聚核苷酸為引物,在大腸桿菌DNA聚合酶I大斷段(KlenowFragment)催化下,合成與探針DNA互補(bǔ)的DNA鏈,當(dāng)在反應(yīng)體系中含有a-32P-dNTP時(shí),即形成放射性同位素標(biāo)記的DNA探針。具有上述優(yōu)點(diǎn),可代替缺口平移法。此外大小、單雙DNA均可標(biāo)記,標(biāo)記均勻,標(biāo)記率高,但也不能標(biāo)記環(huán)狀DNA。隨機(jī)引物法標(biāo)記探針一般長(zhǎng)400~600bp。探針卡是IC制造中對(duì)制造成本影響相當(dāng)大的重要制程之一。

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探針的標(biāo)記方式有放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記。標(biāo)記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標(biāo)記同位素,被標(biāo)記的dNTP本身就帶有磷酸基團(tuán),便于標(biāo)記。特點(diǎn)是比活性高,可達(dá)9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線能量高。用它標(biāo)記的探針自顯影時(shí)間短,靈敏度高。32P的半壽期短,雖使用不方便,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標(biāo)記法有酶標(biāo)法和化學(xué)物標(biāo)記法。酶標(biāo)方法與免疫測(cè)定ELISA方法相似,只是被標(biāo)記的核酸代替了被標(biāo)記的抗體,事實(shí)上被標(biāo)記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素、地高辛標(biāo)記的。除H、He、Li、Be等幾個(gè)較輕元素外,還有U元素以后的元素以外都可進(jìn)行定性和定量分析。虹口區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針品牌

能兼作透射電鏡、能進(jìn)行電子衍射、能作電子熒光觀察等。寶山區(qū)挑選探針按需定制

細(xì)菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個(gè)基因。各種細(xì)菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細(xì)菌特異的核酸探針,通常要采取建立細(xì)菌基因組DNA文庫(kù)的辦法,即將細(xì)菌DNA切成小片段后分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫(kù)。然后用多種其它菌種的DNA作探針來(lái)篩選,產(chǎn)生雜交信號(hào)的克隆被剔除,***剩下的不與任何其它細(xì)菌雜交的克隆則可能含有該細(xì)菌特異性DNA片段。將此重組質(zhì)粒標(biāo)記后作探針進(jìn)一步鑒定,亦可經(jīng)DNA序列分析鑒定其基因來(lái)源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針,常常是比較繁瑣的。寶山區(qū)挑選探針按需定制

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