實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍，如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)，鼠源、禽源等外源病毒檢測(cè)，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、真  菌等），復(fù)制型病毒檢測(cè)（RCL、RCR、rcAAV等）、質(zhì)?？截悢?shù)檢測(cè)及其它工藝雜質(zhì)檢測(cè)等。qPCR檢測(cè)結(jié)果以擴(kuò)增曲線圖呈現(xiàn)，正常擴(kuò)增曲線為S型，分為基線期、指數(shù)擴(kuò)增期、線性擴(kuò)增期和平臺(tái)期；線形光滑、拐點(diǎn)清晰，基線平直或略微下降，無(wú)明顯上揚(yáng)。定量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)標(biāo)曲的要求主要從斜率（與擴(kuò)增效率相關(guān)）和R2兩方面進(jìn)行考察，要求斜率滿足-3.8~-3.1（對(duì)應(yīng)擴(kuò)增效率為83.3%~110%），R2滿足高于0.99。復(fù)制型病毒檢測(cè)試劑盒方法有哪些？廣州病毒檢測(cè)

基因治  療產(chǎn)品是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，通常由各種病毒或非病毒載體攜帶治  療基因組成。在病毒載體中，慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細(xì)胞基因組、穩(wěn)定的基因表達(dá)等特點(diǎn)，被認(rèn)為是蕞有希望的基因治  療載體?？紤]到慢病毒對(duì)人的病原性及相關(guān)的安全性，所使用的慢病毒載體均為復(fù)制缺陷型載體，但在病毒載體生產(chǎn)過(guò)程中可能由于同源重組或非同源重組導(dǎo)致可復(fù)制性慢病毒(RCL)的產(chǎn)生，RCL可以整合到細(xì)胞基因組中，從而導(dǎo)致原ai基因激   活，抑ai基因破壞等，因此，這類產(chǎn)品中的復(fù)制型慢病毒檢測(cè)是安全性檢測(cè)中非常重要的項(xiàng)目，美國(guó)FDA及中國(guó)CDE都要求在生產(chǎn)的整個(gè)過(guò)程及不同階段都要進(jìn)行RCL檢測(cè)，以確保無(wú)RCL的污染。廣州病毒檢測(cè)復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)。

美國(guó)FDA2020年發(fā)布的關(guān)于RCR/RCL病毒檢測(cè)指南提出：對(duì)于RCR/RCL的檢測(cè)包含指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測(cè)定)、PCR/Q-PCR法（通過(guò)psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）、PERT法（產(chǎn)物增強(qiáng)性逆轉(zhuǎn)錄檢測(cè)法）共4種檢測(cè)方法。其中，指示細(xì)胞培養(yǎng)法和Q-PCR法較常用，但各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)推薦并且可以接受的方法還是以指示細(xì)胞培養(yǎng)法為準(zhǔn)。由于細(xì)胞產(chǎn)品一般要新鮮輸注或快速凍存的特殊性，可使用Q-PCR法先進(jìn)行質(zhì)控放行，但指示細(xì)胞培養(yǎng)法應(yīng)同時(shí)進(jìn)行確認(rèn)。

目前針對(duì)RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)的方法差異很大，例如，實(shí)時(shí)定量PCR方法(Q-PCR法)會(huì)因?yàn)榧?xì)胞或質(zhì)粒DNA殘留導(dǎo)致假陽(yáng)性；合胞體形成測(cè)定法需要慢病毒具有完整的能力并且包含Env元件，該方法的靈敏度還未得到驗(yàn)證；標(biāo)志物補(bǔ)救測(cè)定法尚不清楚來(lái)自載體生產(chǎn)過(guò)程中的RCL是否會(huì)濟(jì)活標(biāo)志物；逆轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)定法(PERT)不能區(qū)分RCL和載體顆粒，且細(xì)胞中固有的內(nèi)源性  病毒顆粒也會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的判斷；細(xì)胞培養(yǎng)法檢測(cè)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。如您有需要，歡迎聯(lián)系！復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)方法有哪些？

復(fù)制型病毒/病毒載體回復(fù)突變（ReplicationCompetentVirus,RCV），可產(chǎn)生于病毒載體制造過(guò)程中的所有步驟當(dāng)中。并且，RCV感   染宿主細(xì)胞后能隨宿主細(xì)胞在培養(yǎng)液中增殖、擴(kuò)增對(duì)人體健康具有嚴(yán)重的隱患，是免疫細(xì)胞治     療類產(chǎn)品，如CAR-T產(chǎn)品的主要安全性風(fēng)險(xiǎn)之一。近年來(lái)，CAR-T細(xì)胞制備過(guò)程中，伴隨載體的不斷升級(jí)優(yōu)化，重組產(chǎn)生的復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒(ReplicationCompetentRetrovirus/Lentivirus,RCR/RCL)逐漸降低，但產(chǎn)生RCR/RCL的風(fēng)險(xiǎn)隱患至今仍不能完全排除。由2022年5月發(fā)布的《體外基因修飾系統(tǒng)藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》指出RCR/RCL檢測(cè)作為安全性檢測(cè)在細(xì)胞藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過(guò)程中至關(guān)重要，相關(guān)產(chǎn)品不得檢出RCR/RCL，可知病毒載體相關(guān)產(chǎn)品中，RCR/RCL病毒檢測(cè)至關(guān)重要。復(fù)制型慢病毒檢測(cè)的法規(guī)監(jiān)管要求。寧波復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)

南京正揚(yáng)生物開發(fā)的復(fù)制型慢病毒檢測(cè)試劑盒的靈敏度是多少？廣州病毒檢測(cè)

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心(CDE)發(fā)布了《體內(nèi)基因治   療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》，對(duì)基因治    療產(chǎn)品的質(zhì)量屬性分析給出了指導(dǎo)意見，強(qiáng)調(diào)基于質(zhì)量研究和關(guān)鍵質(zhì)量屬性（Criticalqualityattributes,CQA）的鑒別建立完善的質(zhì)量控制策略，常見的質(zhì)量研究項(xiàng)目包括但不限于鑒別、結(jié)構(gòu)分析、生物學(xué)活性、純度、雜質(zhì)、含量、轉(zhuǎn)染/感    染效率、一般理化特性等。rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒作為生產(chǎn)過(guò)程中的工藝雜質(zhì)，其限度尚未有明確的標(biāo)準(zhǔn)要求，行業(yè)普遍建議rAAV病毒原液或終產(chǎn)品（比原液多了分裝的工藝）中的rcAAV的含量應(yīng)小于1rcAAV/10?rAAVvectorgenome，因此必須采用高靈敏度的方法才能對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)和定量分析。目前rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)常采用2種方法，即基于細(xì)胞培養(yǎng)的檢測(cè)方法和qPCR快檢法。廣州病毒檢測(cè)