磁珠法核酸提取的基本原理:核酸結(jié)合到磁珠上主要依靠靜電作用、疏水作用和氫鍵作用。細(xì)胞或組織在裂解液作用下,其中的DNA/RNA被釋放出來。此時經(jīng)過表面修飾的超順磁性氧化硅納米磁珠即與核酸進(jìn)行“特異性結(jié)合”,形成“核酸-磁珠復(fù)合物”。然后在外加磁場的作用下,復(fù)合物即分離出來。蕞后經(jīng)過洗脫液洗去非特異性吸附的雜志、去鹽、純化后,即得到欲提取的核酸物質(zhì)。磁珠法核酸提取即可通過手工提取也可通過自動化核酸提取平臺進(jìn)行提取。宿主細(xì)胞殘留核酸提取過程中有哪些因素會導(dǎo)致提取效果不佳?深圳RCL核酸提取公司
磁珠法核酸提取一般可以分為四步:裂解——結(jié)合——洗滌——洗脫洗滌:核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質(zhì)、多糖、脂肪等其他生物大分子物質(zhì)更具親水性,根據(jù)它們理化性質(zhì)的差異,用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。用無水乙醇沉淀DNA,這是實驗中蕞常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學(xué)反應(yīng),對DNA很安全,因此是理性的沉淀劑。當(dāng)加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。洗脫:加水或者EB破壞高鹽環(huán)境,形成低鹽環(huán)境,使DNA從磁珠上脫落。廣州復(fù)制型腺相關(guān)病毒核酸提取常見問題南京正揚生物自主研發(fā)的核酸提取試劑有哪些?
核酸提取時,加標(biāo)回收率的定義及注意事項:加標(biāo)回收率是指在測定樣品的同時,于同一樣品的子樣中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測定,將其測定結(jié)果扣除樣品的測定值,以計算回收率。加標(biāo)回收設(shè)置的注意事項:①同一樣品的子樣取樣體積必須相等;②各類子樣的測定過程必須按相同的操作步驟進(jìn)行。③加標(biāo)量不能過大,一般為待測物含量的0.5~2.0倍,且加標(biāo)后的總含量不應(yīng)超過方法的測定上限。④加標(biāo)物的濃度宜較高,加標(biāo)物的體積應(yīng)很小,一般以不超過原始試樣體積的1%為好。
南京正揚生物自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留核酸提取試劑盒利用磁珠法的原理,提取純化生物制品中殘留的微量宿主細(xì)胞DNA/RNA,產(chǎn)品使用事項包括以下幾點:1.磁珠懸浮液嚴(yán)禁冷凍和離心,以免損傷磁珠,磁珠使用前務(wù)必充分混勻。2.裂解液結(jié)合液、洗滌液A、洗滌液B在低于10℃時可能出現(xiàn)白色結(jié)晶,若出現(xiàn)沉淀,請37℃水浴重新溶解后使用。3.請盡量在完成樣本純化處理當(dāng)天進(jìn)行后續(xù)的DNA檢測,以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。4.請務(wù)必仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書,并嚴(yán)格按照操作步驟完成操作。南京正揚自主研發(fā)的核酸提取試劑盒的原理是什么?
CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測中,磁珠法核酸提取回收率偏低的原因有哪些?樣品問題:樣品存在抑制;操作原因:①洗滌液配制操作,外加有機(jī)溶劑的體積或純度不正確;②漏加或少加試劑組分;③磁珠保存不當(dāng),冷凍過;④在提取過程中將樣品管高速離心或長時間離心;⑤磁力架不匹配,磁性較弱;自動化核酸提取設(shè)備原因:①自動化核酸提取設(shè)備的磁分離方式設(shè)計有問題、設(shè)備的磁場弱;②使用自動化設(shè)備進(jìn)行核酸提取時所用的參數(shù)設(shè)置不合適;其他原因:①耗材非低吸附耗材;②耗材中有抑制物;③實驗室存在抑制物;核酸提取的方法有哪些?上海病毒核酸提取特點
宿主細(xì)胞核酸提取能用于支原體提取嗎?深圳RCL核酸提取公司
核酸提取的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之紫外光譜法:即使是蕞小的樣品(1~2L)也可以用紫外光譜法進(jìn)行測量。DNA、RNA和單個核苷酸和寡核苷酸在260納米處吸收紫外線。在1厘米的比色皿中,1.0的A260相當(dāng)于50μg/mLDNA和40μg/mLRNA。A260/A280比率提供了關(guān)于分離的核酸純度的信息。純的DNA和RNA的比率分別為1.8和2.0。污染物如蛋白質(zhì)、苯酚通常以不同的波長吸收光線。如果在230、280或320納米處也有吸收,這表明分離物中存在雜質(zhì)。如果該比率小于1.8,則可能是蛋白質(zhì)的污染。A230/260的比率>1也說明了這一點。深圳RCL核酸提取公司