美國FDA2020年發(fā)布的關(guān)于RCR/RCL病毒檢測指南提出：對于RCR/RCL的檢測包含指示細胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/Q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）、PERT法（產(chǎn)物增強性逆轉(zhuǎn)錄檢測法）共4種檢測方法。其中，指示細胞培養(yǎng)法和Q-PCR法較常用，但各國監(jiān)管機構(gòu)推薦并且可以接受的方法還是以指示細胞培養(yǎng)法為準。由于細胞產(chǎn)品一般要新鮮輸注或快速凍存的特殊性，可使用Q-PCR法先進行質(zhì)控放行，但指示細胞培養(yǎng)法應(yīng)同時進行確認。為什么要做復(fù)制型慢病毒檢測？復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測服務(wù)

rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測過程中，qPCR反應(yīng)體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項？①qPCR的整個操作要低溫環(huán)境進行，防止模板的降解，試劑避免反復(fù)凍融。②配制反應(yīng)體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應(yīng)體系要統(tǒng)一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時候考慮到操作或耗材帶來的損耗需要多配若干個反應(yīng)所需體系。③添加模板的時候注意搶頭要排盡，不求快，平行加樣。加樣后要進行離心，將液體集中在管底，離心后注意觀察反應(yīng)體系液面是否平整，氣泡是否排盡。④每個樣品建議做3個復(fù)孔，每次除了樣品以外還要加陽性對照和陰性對照。上海RT-PCR法病毒檢測公司為什么要做復(fù)制型病毒檢測？

盡管逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體被設(shè)計為具有復(fù)制缺陷，但仍有可能在生產(chǎn)過程中或輸注到患者體內(nèi)后發(fā)生重組，從而產(chǎn)生新的具有復(fù)制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒（RCR/RCL）。FDA在有關(guān)細胞產(chǎn)品和患者中檢測RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復(fù)制型慢病毒的指南中建議使用適當?shù)?span style="color:#f5c81c;">生物學(xué)和/或分子檢測方法進行病毒載體、細胞產(chǎn)品和輸注后患者中的RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/RCL復(fù)制型慢病毒檢測。南京正揚生物自主研發(fā)了可用于基于細胞培養(yǎng)方法的qPCR檢測以及CAR-T終產(chǎn)品qPCR檢測的RCL及RCR檢測專   用試劑盒，幫助研究者進行分析。

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用qPCR法進行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測時，出現(xiàn)擴增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴增現(xiàn)象：反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴增曲線不平滑現(xiàn)象：可能與ROX加入量不足相關(guān)，個別設(shè)備有ROX校正功能，不同型號設(shè)備對ROX的需求量會有差異，需設(shè)置實驗摸索合適的ROX加入量。歡迎了解正揚復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測服務(wù)