根據(jù)FDA2006年發(fā)布的關(guān)于RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的指南和2018年新更新的檢測指南征求意見稿，目前RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒檢測的金標(biāo)準(zhǔn)是共培養(yǎng)法，即將測試樣品(病毒載體上清液、生產(chǎn)終末細(xì)胞、體外轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞等)與允許細(xì)胞系進(jìn)行共培養(yǎng)，至少5次傳代以擴(kuò)增任何潛在的RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒／RCL復(fù)制型慢病毒，然后在指示階段，通過檢測特異性核酸、蛋白的方法進(jìn)行測定，qPCR/RT-PCR法具備操作便捷快速、特異性好、靈敏度高、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，是RCR/RCL檢測的優(yōu)  選方法。南京正揚有復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測試劑盒的裝量是多少？蘇州rcAAV病毒檢測產(chǎn)品

復(fù)制型病毒/病毒載體回復(fù)突變（ReplicationCompetentVirus,RCV），可產(chǎn)生于病毒載體制造過程中的所有步驟當(dāng)中。并且，RCV感   染宿主細(xì)胞后能隨宿主細(xì)胞在培養(yǎng)液中增殖、擴(kuò)增對人體健康具有嚴(yán)重的隱患，是免疫細(xì)胞治     療類產(chǎn)品，如CAR-T產(chǎn)品的主要安全性風(fēng)險之一。近年來，CAR-T細(xì)胞制備過程中，伴隨載體的不斷升級優(yōu)化，重組產(chǎn)生的復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒(ReplicationCompetentRetrovirus/Lentivirus,RCR/RCL)逐漸降低，但產(chǎn)生RCR/RCL的風(fēng)險隱患至今仍不能完全排除。由2022年5月發(fā)布的《體外基因修飾系統(tǒng)藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》指出RCR/RCL檢測作為安全性檢測在細(xì)胞藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過程中至關(guān)重要，相關(guān)產(chǎn)品不得檢出RCR/RCL，可知病毒載體相關(guān)產(chǎn)品中，RCR/RCL病毒檢測至關(guān)重要。蘇州RT-PCR法病毒檢測優(yōu)缺點復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測。

用qPCR進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測時，哪些因素會對檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響？①qPCR引物探針的序列特異性：為保證方法高靈敏度和檢出率，用于qPCR檢測的特異序列必須是存在于高度保守區(qū)域內(nèi)的穩(wěn)定序列，并且需要散布在基因組上，保證不會因工藝導(dǎo)致的殘留偏好而引起漏檢。②qPCR實驗室能力驗證：為滿足檢測要求，應(yīng)對實驗室硬件和軟件能力進(jìn)行確認(rèn)。實驗室設(shè)計應(yīng)按實驗流程分區(qū)操作，每個操作區(qū)域配置相應(yīng)設(shè)施、設(shè)備及耗材，建立實驗室質(zhì)量管理體系，考核實驗人員的操作能力及數(shù)據(jù)分析解讀能力等。

qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細(xì)胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細(xì)胞培養(yǎng)法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細(xì)胞產(chǎn)品制備過程中進(jìn)行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細(xì)胞采用基于細(xì)胞培養(yǎng)方法測定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過程中不存在RCL的風(fēng)險)，細(xì)胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測法快速放行。qPCR法RCL/RCR病毒檢測：目前許多CAR-T企業(yè)采用Q-PCR方法直接測定CAR-T終產(chǎn)品中的VSV-G序列或psi-gag序列，因考慮到CAR-T細(xì)胞種產(chǎn)品一般需要新鮮輸注的特殊情況，基于細(xì)胞培養(yǎng)法的RCL/RCR檢測方法周期較長，建議在細(xì)胞產(chǎn)品制備過程中進(jìn)行多面控制(如對慢病毒載體及生產(chǎn)終末細(xì)胞采用基于細(xì)胞培養(yǎng)方法測定RCL/RCR，以確保生產(chǎn)工藝過程中不存在RCL的風(fēng)險)，細(xì)胞終產(chǎn)品階段可采用qPCR檢測法快速放行。。復(fù)制型慢病毒檢測要求有哪些？

《中國藥典》2020版三部《人用基因醫(yī)治制品總論》以及CDE發(fā)布的細(xì)胞基因醫(yī)治相關(guān)的技術(shù)指導(dǎo)原則中均提到，在設(shè)計為復(fù)制缺陷型或條件復(fù)制型載體的情況下，應(yīng)分析是否存在殘留的復(fù)制型或野生型載體及其水平。南京正揚生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制性腺相關(guān)病毒檢測試劑盒，可同時分別精確測定樣品中高濃度的目標(biāo)載體和低濃度的復(fù)制型載體濃度，從而有效地提高了方法靈敏度，滿足法規(guī)要求的無復(fù)制型腺相關(guān)病毒（rcAAV）的污染，可用于GMP生產(chǎn)的rAAV質(zhì)量控制。南京正揚有復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測試劑盒嗎？合肥復(fù)制型病毒檢測特點

南京正揚有復(fù)制型慢病毒檢測試劑盒性能如何？蘇州rcAAV病毒檢測產(chǎn)品

《CAR-T細(xì)胞治  療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測方法主要有指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）和轉(zhuǎn)錄酶活性測定法(PERT)等。其中，利用指示細(xì)胞培養(yǎng)法對生產(chǎn)過程中的病毒（上清液、病毒生產(chǎn)終末期細(xì)胞）存在的RCL進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并在培養(yǎng)終點進(jìn)行重復(fù)檢測是FDA推薦的RCL檢測方法。

《CAR-T細(xì)胞治  療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測方法主要有指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）和轉(zhuǎn)錄酶活性測定法(PERT)等。其中，利用指示細(xì)胞培養(yǎng)法對生產(chǎn)過程中的病毒（上清液、病毒生產(chǎn)終末期細(xì)胞）存在的RCL進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，并在培養(yǎng)終點進(jìn)行重復(fù)檢測是FDA推薦的RCL檢測方法。 蘇州rcAAV病毒檢測產(chǎn)品