在蛋白表達(dá)和純化過程中,提高蛋白的產(chǎn)量和純度是關(guān)鍵目標(biāo)。以下是一些關(guān)鍵技術(shù)和策略:1.優(yōu)化表達(dá)載體:設(shè)計(jì)表達(dá)載體是提高蛋白表達(dá)的關(guān)鍵步驟。通過使用密碼子優(yōu)化算法和表達(dá)載體選擇指南,可以優(yōu)化編碼序列并選擇合適的表達(dá)載體,從而提高蛋白的表達(dá)量和純度。2.提高蛋白溶解度:較低的蛋白質(zhì)溶解度是造成重組蛋白表達(dá)產(chǎn)量低的一個(gè)關(guān)鍵因素。可以通過調(diào)整表達(dá)條件參數(shù)(如溫度)來提高蛋白質(zhì)的溶解度。例如,將培養(yǎng)溫度從37°C降至33°C可以提高蛋白表達(dá)。3.使用融合伴侶:利用分子融合伴侶技術(shù)可以提高蛋白的溶解度和表達(dá)量。常用的融合伴侶包括His標(biāo)簽、GST標(biāo)簽等,這些標(biāo)簽可以增強(qiáng)蛋白的溶解性和穩(wěn)定性。4.優(yōu)化培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件:選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件對蛋白表達(dá)至關(guān)重要。例如,向培養(yǎng)基中添加特定的試劑(如組蛋白脫乙?;敢种苿┛梢蕴嵘鞍妆磉_(dá)。5.親和純化技術(shù):親和純化是利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間的特異親和力,達(dá)到分離目的的一類純化技術(shù)。His/GST親和純化是常用的方法,可以高效地從混合物中純化目標(biāo)蛋白。它已經(jīng)預(yù)先混合了上樣緩沖液,用戶只需取適量(通常為5-10 μL)直接加入凝膠孔中即可進(jìn)行電泳。福建大腸桿菌表達(dá)技術(shù)服務(wù)開發(fā)
DNA Marker I Plus:精細(xì)的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DNA Marker I Plus 是一種即用型的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),廣應(yīng)用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于估算DNA片段的大小和進(jìn)行粗略定量。它由7條線狀雙鏈DNA條帶組成,覆蓋100 bp至700 bp的范圍,特別適合用于小片段DNA的分析。產(chǎn)品特點(diǎn)組成:包含100 bp、200 bp、300 bp、400 bp、500 bp、600 bp和700 bp的DNA條帶,其中400 bp條帶加亮顯示。即用型設(shè)計(jì):已預(yù)混1×Loading Buffer,使用時(shí)無需額外添加,直接上樣。清晰的條帶:電泳圖像清晰,背景干凈,條帶亮度均勻。穩(wěn)定性高:在室溫下可穩(wěn)定保存三個(gè)月,長期保存建議置于-20℃。注意事項(xiàng)保存條件:建議低溫保存,避免反復(fù)凍融,以防止核酸酶污染導(dǎo)致條帶降解。避免加熱:使用前無需加熱,直接上樣。電泳緩沖液:及時(shí)更換電泳緩沖液,使用高質(zhì)量的瓊脂糖,以獲得比較好分離效果。染料選擇:如果使用Goldview等染料,由于靈敏度較低,建議適當(dāng)增加Marker的上樣量。應(yīng)用場景DNA Marker I Plus 適用于常規(guī)PCR產(chǎn)物、基因組DNA片段等的大小鑒定,特別適合需要精確測定DNA片段大小的實(shí)驗(yàn),如基因編輯驗(yàn)證、小片段插入/缺失分析等。福建酶定向進(jìn)化技術(shù)服務(wù)Taq PCR Master Mix (2×) (Without Dye) 展現(xiàn)出的性能。其高靈敏度使其能夠檢測到極低濃度的目標(biāo)DNA。
DL3000 DNA Marker:精細(xì)的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)DL3000 DNA Marker 是一種即用型的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn),廣應(yīng)用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于估算DNA片段的大小。它由多條線狀雙鏈DNA片段組成,能夠?yàn)镈NA分析提供精確的分子量參考。產(chǎn)品特點(diǎn)組成:DL3000 DNA Marker 包含9條線狀雙鏈DNA片段,片段大小分別為100 bp、250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、1500 bp、2000 bp、2500 bp和3000 bp。即用型設(shè)計(jì):已預(yù)混1×Loading Buffer,使用時(shí)無需額外添加,直接上樣。清晰的條帶:電泳圖像清晰,背景干凈,條帶亮度均勻,其中750 bp條帶亮度加倍,便于觀察。穩(wěn)定性高:在2-8℃可保存6個(gè)月,長期保存建議置于-20℃。使用方法上樣量:建議每次取5 μL直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中。電泳條件:推薦使用1.0%-2.0%的瓊脂糖凝膠,1×TAE或0.5×TBE緩沖液,電壓5-10 V/cm。染色與觀察:電泳結(jié)束后,使用溴化乙錠(EB)或其他DNA染料染色,在紫外燈下觀察。注意事項(xiàng)保存條件:建議低溫保存,避免反復(fù)凍融。瓊脂糖質(zhì)量:電泳時(shí)應(yīng)盡量選用高質(zhì)量的瓊脂糖,以獲得比較好分離效果。電泳緩沖液:及時(shí)更換電泳緩沖液并使用新制備的凝膠,以免影響電泳結(jié)果。
TAFE凝膠電泳緩沖液(10×):高效、穩(wěn)定的核酸電泳選擇TAFE凝膠電泳緩沖液(10×)是一種廣應(yīng)用于核酸電泳的高效緩沖液,主要由200 mM Tris-乙酸和5 mM EDTA組成。這種緩沖液以10倍濃縮的形式提供,使用時(shí)需用蒸餾水或去離子水稀釋至1×工作液。產(chǎn)品特點(diǎn)高效分離:TAFE緩沖液在核酸電泳中表現(xiàn)出色,尤其適用于分離小片段核酸,能夠提供清晰的電泳條帶。穩(wěn)定性高:10倍濃縮的設(shè)計(jì)使其在儲存和使用過程中更加穩(wěn)定,適合長期保存。兼容性強(qiáng):適用于瓊脂糖凝膠電泳,兼容常見的核酸染料(如EB或GoldView),滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。使用便捷:使用前只需稀釋至1×工作液,操作簡單。使用方法稀釋緩沖液:取適量的10×TAFE緩沖液,加入去離子水稀釋至1×工作液。例如,取10 mL的10×TAFE緩沖液,加入90 mL去離子水。制備凝膠:使用稀釋后的1×TAFE緩沖液制備瓊脂糖凝膠。電泳操作:將核酸樣品加入凝膠孔中,使用1×TAFE緩沖液進(jìn)行電泳。染色與觀察:電泳結(jié)束后,使用合適的核酸染料對凝膠進(jìn)行染色,并在紫外透射儀下觀察結(jié)果。保存與注意事項(xiàng)保存條件:TAFE凝膠電泳緩沖液(10×)應(yīng)保存在室溫下,避免長時(shí)間暴露在高溫或強(qiáng)光下。使用期限:未開封的產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。Pfu Master Mix (2x)(With Dye)在復(fù)雜模板擴(kuò)增中的表現(xiàn) 其優(yōu)化的緩沖液和酶組合能夠高效擴(kuò)增高GC含量。
在當(dāng)今生物科技領(lǐng)域,大腸桿菌表達(dá)病毒樣顆粒技術(shù)服務(wù)正以其獨(dú)特的優(yōu)勢和廣泛的應(yīng)用前景,成為科研和產(chǎn)業(yè)界的關(guān)注焦點(diǎn)。病毒樣顆粒(VLPs)是一種由病毒蛋白自行組裝而成的納米級結(jié)構(gòu),其形態(tài)和大小與天然病毒相似,但不含有病毒的遺傳物質(zhì),因此不具備性。大腸桿菌作為一種常用的原核表達(dá)系統(tǒng),在VLPs的生產(chǎn)中具有諸多優(yōu)勢。首先,大腸桿菌生長迅速、培養(yǎng)成本低廉,能夠在短時(shí)間內(nèi)大量繁殖,為VLPs的高效表達(dá)提供了基礎(chǔ)。其次,其遺傳背景清晰,基因操作技術(shù)成熟,便于進(jìn)行基因工程改造,使我們能夠精確地控制VLPs的組裝和表達(dá)。Phusion DNA Polymerase具有極高的保真性,其錯(cuò)誤率比Taq DNA聚合酶低50倍以上,比Pfu DNA聚合酶低6倍。福建酶定向進(jìn)化技術(shù)服務(wù)
Pfu Master Mix (2x)(With Dye)在科研教學(xué)中的應(yīng)用 其易用性和高保真特性使其成為分子生物學(xué)的理想工具。福建大腸桿菌表達(dá)技術(shù)服務(wù)開發(fā)
這項(xiàng)技術(shù)服務(wù)在多個(gè)領(lǐng)域展現(xiàn)出了巨大的應(yīng)用潛力。在疫苗研發(fā)領(lǐng)域,VLP作為一種新型的疫苗候選物,具有良好的免疫原性,能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。江畢赤酵母表達(dá)的VLP疫苗可以針對多種病毒性疾病,為預(yù)防和控制傳染病提供了創(chuàng)新的解決方案。例如,在應(yīng)對一些新興病毒威脅時(shí),VLP疫苗能夠快速啟動研發(fā)和生產(chǎn),為公眾健康提供及時(shí)的保護(hù)。此外,在生物醫(yī)學(xué)研究中,VLP還可以作為藥物載體或診斷試劑的重要組成部分,用于疾病的和檢測。福建大腸桿菌表達(dá)技術(shù)服務(wù)開發(fā)